Грунт body 992 чем разбавить: Грунт боди 992 инструкция чем разбавить – Защита имущества

Если вы хотите выразить благодарность, добавить уточнение или возражение, что-то спросить у автора — добавьте комментарий или скажите спасибо!

Грунтовка для железа антикоррозионная

Всем доброго времени суток!

Теперь нам надо защитить голый металл!

Для этого существуют грунты.

Грунто́вка — состав, наносимый первым слоем на подготовленную к окраске поверхность для создания надёжного сцепления верхних (кроющих) слоёв покрытия с окрашиваемой поверхностью и выравнивания её впитывающей способности. От окрашивающих составов грунтовки отличаются меньшим содержанием пигментов.

Кроме того, грунтовки могут выполнять и другие функции: защищать металл от коррозии, перекрывать поры и другие дефекты окрашиваемой поверхности, а также обеспечивать адгезионное сцепление в системах антикоррозионной защиты металла.

Для начала их можно поделить на 2 группы:

Заборные как правило передаются нам по наследству со словами какая это классная штука и как рисковал брат/кум/сват/сосед вынося его через проходную своего завода)))

Или покупаются на рынке, разлитыми в пластиковые бутылки от прохладительных напитков. Как правило с такой же историей как и те что передавались по наследству)))

Или покупаются в хозмагах и строительных магазинах.

Заборными я их называю потому как они универсальные. Ими можно покрасить и металлический и деревянный забор))) А вот машину не стоит))

Да, они бывают действительно классными, которые держатся как зубами! Но! Пробовать их можно только если у вас есть опыт и вы можете покрасив жестянку и дождавшись высыхания определить качество этого грунта.

Большая половина материала который привозит народ со словами «грунт у меня есть свой» отдаю им назад, ибо им только заборы красить!

Но даже хорошие заборные грунты я применяю только на днище, внутрянке, скрытых полостях. И только тогда когда бюджет совсем скудный.
Как они поведут себя после нанесения на них краски — ХЗ…

Они как правило идут двухкомпонентные. Комплект состоит из двух баночек которые мешаются в определённой пропорции (в зависимости от того какой грунт. изучаем инструкцию или визуально прикидываем её исходя из объёма баночек в комплекте.) Пропорции могут быть от 5:1 до 1:1. Других пока не встречал…
Но кислотные грунты бывают и однокомпонентные.

Нормальные грунты в свою очередь можно разделить на:

1) Антикоррозионные (кислотные) — служат для нанесения первым слоем. Наносится очень тонким слоем, не более 30мкм! Обязательно должны быть перекрыты!
2) Эпоксидные — отличная зашита! Но так же желательно перекрыть их.
3) Наполнительные — служат для запонения пор, рисок от наждачки и других неровностей окрашиваемой поверхности. По ним уже можно смело красить!

В большинстве случаев после борьбы со ржавчиной для выравнивания поверхности придётся использовать шпатлёвку.
Много копий сломано в спорах о том как её наносить. На голый метал или на грунт.

В нашем случае всё очевидно. Поверхность ремонтная, после ржавчины и/или сварки. Её необходимо сначала грунтовать!

По материалам каждый выбирает сам. Это зависит от толщины вашего кошелька и региона проживания. Зачастую многие пишут что первый раз слышат про тех производителей материалы которых я советую применять.

В последнее время я плотно подсел по грунтам на Novol, по вспомогательным материалам и материалам для антикора на APP.

Ибо у этих фирм классное сочетание цена/качество/доступность.

Откровенных разочарований в них у меня не было. Да и подделок под них у нас нет!

Поэтому буду рассказывать какие материалы я использую приводя примеры по этим фирмам.

Начнём по порядку.
Для начала ещё раз хорошенько отмываем поверхность, продуваем её сжатым воздухом.
Затем матуем поверхность. Делается это для улучшения адгезии.

Адгезия (от лат. adhaesio – прилипание) – способность лакокрасочного покрытия к прочному сцеплению с окрашиваемой поверхностью. Адгезия обусловлена физическим и химическим взаимодействием активных групп связующего с активными центрами на поверхности подложки. При низкой адгезии ЛКМ к поверхности пленка краски будет легко отслаиваться, то есть покрытие будет недолговечным, с низкими защитными и механическими свойствами. Огромное значение для повышения адгезии ЛКМ к подложке играет правильная подготовка поверхности к окрашиванию.

Очень интересный способ подготовки металла встретил в БЖ у vmg1961

Да и в остальных темах там много интересного!

Для этих целей используем наждачку. Наносим ей риски на металле. грунт за них будет лучше держаться.
Имхо оптимальный вариант — 240-я. Если использовать более крупную то риски будут слишком глубокими, их сложно будет заполнить и получить ровную поверхность.
Если тереть более мелкой то адгезия будет ниже!

Если мы используем новые детали то их так же надо подготовить. Причём более тщательно, т.к. качество их металла оставляет желать лучшего!

Они обычно идут в чёрном транспортировочном грунте. Грунт этот надо обязательно счищать! до голого металла. Как изнутри так и снаружи.

Дополнено со слов vmg1961

«Если «черный» транспортный грунт катафорезный, и об этом есть соответствующая наклейка — сдирать его категорически не надо. Ибо под ним, как правило, слой меиталлического цинка. Его можно либо разматовать и перекрыть эпоксидным — либо использовать специальные адгезионные грунты для гладких поверхностей.

На приличных деталях клеится этикетка с указанием, что деталь загрунтована катафорезным грунтом. Если ее нет то делаем тест. Тряпку мочим растворителем для краски — кладем ее на деталь и ждем 15-30 минут. Если растворитель никак не повлиял на грунт — то это правильный, катафорезный. Если грунт повреждается растворителем — его надо сносить нафиг. Этот тест еще называют «сольвент-тест»…»

Перед нанесением грунта на заматованную поверхность её обязательно обезжирить!

Это конечно можно делать и обычным растворителем, но в дальнейшем перед покраской мы всё равно будем использовать специальный обезжириватель (антисиликон).
Всё равно банку покупать. Поэтому лучше купить её заранее и использовать на всех этапах.
Я в основном покупаю такой

Затем ждём полного выветривания обезжиривателя и приступаем к грунтованию кислотником.

Все грунты которые я использую — двухкомпонентные!

Кислотник обычно использую Novol Protect 340

Непосвященного автовладельца при кузовном ремонте больше всего беспокоит, попадет ли мастер в цвет. Это важно, но интереснее другое. Сколько правильный цвет будет держаться на замененном или восстановленном элементе? Антикоррозийная грунтовка для защиты поверхности металла, примененная при ремонте, способна внести большой вклад в счастливое будущее вашего автомобиля. Грунт является разделяющим слоем между шпатлевкой и эмалью или поверхностью металла и эмалью. Он дает хорошую адгезию, основная антикоррозийная защита обеспечивается им же.

Классификация материалов

Стоит разобраться со всеми этими ГФ 021 и Body 992, узнать, что представляют собой алкидная основа и эпоксидный состав, а также всеми любимые грунты «по ржавчине». Все они попадают под понятие «антикоррозийный грунт», и все они предназначены к применению по металлу, но имеют разный состав и свойства.

Любая грунтовка по металлу состоит из основы и заполнителей. Основа может быть:

• алкидная;
• алкидно-акриловая;
• алкидно-уретановая;
• фенольно-масляная;
• мочевинная;
• полиуретановая;
• меламинная;
• поливинилхлоридная;
• эпоксидная.

Существуют и другие варианты. Наиболее широко применяются алкидная композиция и эпоксидный вариант.

Антикоррозийный эффект зависит от принципа взаимодействия с основанием. Он бывает:

• пассивирующий;
• протекторный;
• изолирующий;
• фосфатирующий;
• модифицирующий.

Существует также классификация по особенностям применения. Различают составы:

• однокомпонентные;
• двухкомпонентные;
• спиртовые.

• первичный по металлу;
• двухкомпонентный под покраску;
• по пластику;
• по ржавчине;
• разделяющий.

Механизм защиты от коррозии

Пассивирующая грунтовка содержит соли хромовой кислоты (хроматы). Это продукты взаимодействия кислоты и металла (Sr, Ba, Ca, Zn, Pb). Принцип действия основан на растворении активных компонентов с образованием отрицательно заряженных ионов. В правильной концентрации такой раствор препятствует распространению коррозии. Это самый распространенный тип защиты. Он применим практически для любого металла. Примером может служить алкидная грунтовка ГФ 017 или эпоксидный грунт ЭП 076.

Протекторная грунтовка использует принцип катодной защиты металла. Содержит по большей части цинковый порошок, измельченный до состояния пыли. Цинк относительно железа имеет электроотрицательный потенциал. Кузов автомобиля становится катодом, а наполнитель грунтовки анодом, проникшая внутрь покрытия влага выполняет функции электролита. В этой паре окисляемым расходуемым компонентом является цинк. Эпоксидный грунт ЭП 057 является протекторным.

Изолирующая грунтовка создает на поверхности металла непроницаемый барьер. В их составе по большей части инертные материалы: оксиды металлов (Fe, Zn, Ti). Эффективность изоляции со временем снижается, диффузия влаги и кислорода сквозь пленку ускоряется. К числу изолирующих грунтовок относится широко известная алкидная грунтовка ГФ 021 или подобная ей body 992.

Фосфатирующий грунт можно считать разновидностью пассивирующего. Они имеют похожий механизм защиты. Разница в том, что вместо хромовой кислоты используется фосфорная. Эффективность в этом варианте заметно ниже. Часто фосфатирующий грунт применяют для создания промежуточного адгезионного слоя, а затем покрывают еще одним пассивирующим. Слой фосфатов улучшает сцепление. Фосфорная кислота в неверной концентрации сама может стать причиной коррозии. Как фосфатирующий, может быть использован материал ВЛ 02.

Модифицирующий грунт применяется прямо по ржавчине при невозможности или экономической нецелесообразности ее удаления. Окислы включаются в состав покрытия.

Такая грунтовка имеет в составе около 10 % ортофосфорной кислоты, возможны и другие модификаторы. Они образуют с веществами, содержащимися в ржавчине, нерастворимые соединения. Это не предотвращает последующей коррозии, с ней борются другие компоненты состава. Они могут иметь пассивирующее, протекторное или изолирующее действие. Примером может служить состав ВД-АК-011. По образованной преобразователями ржавчины шероховатой поверхности часто наносится изолирующая алкидная композиция, как ГФ 021 или Body 992.

Применимость материалов

Для разных задач и на разных этапах работы применяют разные материалы. Первичный однокомпонентный грунт наносят по голому металлу для защиты от коррозии. Такие составы сохнут сутки и более. Для защиты кузова автомобилей применяются ограниченно. Простая и дешевая алкидная грунтовка ГФ 021 или body 992 подходят для защиты металла в не подверженных механическим и химическим воздействиям местах.

Быстросохнущий однокомпонентный нитрогрунт нельзя использовать под акриловые краски и эмали с эффектом «металлик». Но на него ложится алкидная или нитрокраска. Однокомпонентные акриловые грунты просты в работе, являются быстросохнущими и совместимы с самыми различными окрасочными материалами. Разделяющие составы, формируют промежуточный слой между плохо совместимыми материалами. Их также применяют при отсутствии уверенности в совместимости.

Двухкомпонентные составы применяются, как базовые. В основу вводится отвердитель. Могут наноситься более толстым слоем для заполнения микронеровностей и пор. Двухкомпонентные составы способны образовывать мягкую или твердую поверхность. Первая легче шлифуется, вторая прочнее и качественнее.

Спиртовые грунты удобны, быстро сохнут, но дают усадку. Они применимы для мест, где это не критично. Для пластика применяются материалы с пластификаторами в составе.

Не стоит слишком увлекаться средствами, применимыми по ржавчине. По возможности деталь перед обработкой нужно очистить и применить действительно надежный пассивирующий состав. Все варианты, предназначенные для применения по ржавчине, являются вынужденной мерой. Их стоит компоновать с другими средствами обработки. Это могут быть ГФ 021 или body 992.

Итоги

Теперь вы немного разобрались в материалах для защиты кузова автомобиля от коррозии и аббревиатуры вроде ЭП 076, ВЛ 02, ГФ 021, Body 992 уже не пугают. Их применимость, преимущества и недостатки вытекают из состава. В профессиональных мастерских материалы часто компонуют. На тщательно очищенную и обезжиренную поверхность наносят тонким слоям фосфатирующий состав, его сушат и после покрывают твердой 2-х компонентной композицией. Последнюю перед покраской тщательно шлифуют.

Видео по теме:

23.) Эпоксидный и кислотный грунт. Их отличия

Антикоррозийная грунтовка применяется для обработки металлических, бетонных и деревянных поверхностей. Она защищает материал от коррозии, повышает его устойчивость к атмосферным воздействиям. Кроме того, такая грунтовка необходима для того, чтобы улучшить адгезионные свойства обрабатываемого материала, то есть обеспечивает качественное сцепление поверхности с последующим слоем краски или лака. Каких видов бывают грунтовочные составы?

Виды грунтовки

По принципу действия и составу

По принципам технологического воздействия антикоррозийную грунтовку делят на:

• Вытравливающую. Применяется только для металлических поверхностей. Такая грунтовка содержит в составе смеси специальных кислот, которые при нанесении разъедают поверхностный слой металла для лучшей адгезии последующей грунтовки.

• Укрепляющую. Такая грунтовка по железу содержит элементы металлов, которые имеют отрицательный химический потенциал по сравнению с железом. В первую очередь коррозия поражает эту грунтовку, при этом железо остаётся целым.

• Антикоррозийную. Такая грунтовка защищает непосредственно железо от коррозии. В народе такая процедура называется антикора.

• Для пластиковых поверхностей. При грунтовании пластика происходит выравнивание шероховатостей и царапин за счёт пластичных свойств самой грунтовки. Краска надёжно цепляется за грунтованную поверхность пластика. Особенно это имеет значение для авторемонта, так как большое количество деталей изготавливается из пластика.

• Грунтовка для алюминия. Алюминий очень плохо сцепляется с краской. Поэтому важен промежуточный этап в виде процесса грунтования, который позволяет нанести краску без проблем, и таким образом придать алюминиевым деталям нужный цвет.

• На основе акрила. Такой грунт универсальный, стойкий к перепаду температур и воздействию влаги, долговечный.

Также есть универсальная алкидная грунтовка. Продается в жестяных банках и бочках. Назначение этой грунтовки – усиление взаимопроникновения эмали при покраске. Предварительно грунтованная поверхность после покраски получает надёжную защиту от внешнего воздействия. Универсальность такой грунтовки заключается в том, что ею грунтуют металл и пиломатериал как под открытым небом, так и в помещении. Выпускается в 3-х цветах: серый, черный, коричневый.

Алкидная грунтовка будет иметь антикоррозийный эффект, только если поверхность, на которую она наносится, подготовлена, а именно очищена, обезжирена, отшлифована от грязи и масляных пятен.

Технология нанесения алкидной грунтовки может быть выполнена в ручную, кистью или валиком или механически с помощью пульвелизатора.

Поверхность очищают от ржавчины, неровностей после чего грунтуют. Грунт заполняет микротрещины и шероховатости, выравнивая поверхность, обеспечивает надёжное сцепление с краской. Можно сказать, что без грунтовки не состоится связи между поверхностью обрабатываемого изделия и слоем краски. Состоит грунтовка из плёнкообразующих веществ, наполнителя, красящего и ускоряющего высыхание вещества.

По металлу

Грунтовка по металлу подразделяются на следующие виды:

• Смесь для изоляции. Образует на металле пленку, которая способствует защите от проникновения воды, кислорода в активной форме и веществ, участвующих в процессе окисления. Для грунтовки этого типа используются акриловые смеси с добавлением окиси цинка, железного сурика и талька. Ярким представителем грунтовок с изолирующими свойствами является алкидная грунтовка ГФ-021 и эпоксидная ЭП-0010.

• Грунтовка, делающая поверхность металла пассивным к окислению. Такая грунтовка защитит материал от окисления лучше других. Она образует плотную оксидную плёнку, вступая в реакцию на поверхности металла, после чего металл не способен окисляться и разрушаться. К таким грунтовкам можно отнести ГФ-0119 и ФЛ-03К.

• Грунтовки, способствующие насыщению поверхностного слоя оксидом фосфора. Благодаря наличию в составе ортофосфорной кислоты грунт глубоко проникает в поверхность обработки, увеличивая в несколько раз площадь сцепления, позволяя повысить прочность и защиту обрабатываемых конструкций. Такие грунтовки используют для черных и цветных металлов и даже для оцинкованного железа. В эту категорию можно записать грунтовку ВЛ-023 и ВЛ-02.

• Грунтовка с протекторными свойствами. Состав такой грунтовки на 90% состоит из порошка металлов цинка и свинца или порошка сплава магния с цинком, остальные 10% – связующие вещества. При грунтовании продукты коррозии взаимодействуют с грунтовкой и образуют защиту в виде панциря. При нарушении целостности такого защитного слоя оксиды цинка выступают на защиту и препятствуют окислению металла. Такие протекторные особенности используют широко в кораблестроении: обрабатывают подводную часть кораблей, прибрежных сооружений из металла. Протекторные грунтовки представлены на рынке ЭП-0284 и ЭП-057.

• Грунтовка для преобразования ржавчины. При покрытии грунтовкой для преобразования от ржавчины вещества вступают в реакцию и образуют плотный слой. Поверхность металлического изделия можно не очищать от оксида железа – это удобно. Представителями такой грунтовки являются ХВ-0278 и ЭП-0199.

Грунтовка в баллоне

Для многих грунтовая покраска означает банку и кисть или банку и пульвелизатор, а что если их объединить? Получится грунтовка в баллончиках. Так промышленным способом удалось сделать удобным и практичным процесс грунтовки различных поверхностей перед покраской.

Такую грунтовку не надо разводить, мешать палкой и наносить кистью на поверхность. Её надо только встряхнуть раз пять и, вуаля, всё готово – нажимай и грунтуй. Антикоррозионная грунтовка в баллончиках – делает работу эффективнее с точки зрения потраченного на эту грунтовку времени.

Грунтовка из баллончика равномерно распределяется по поверхности при этом ни компрессора, ни кистей – всё быстро, эффективно, качественно. На любую поверхность как внутри, так и снаружи, при этом можно выровнять микроцарапины за счёт слоя грунтовки. Сушка такой грунтовки занимает мало времени. Грунтовка в сочетании с покраской увеличивает срок антикоррозионного покрытия любой поверхности. Благодаря аэрозольному принципу распыления, такая грунтовка попадает ровным слоем в самые недоступные места и экономит много времени.

На видео: грунтовка из баллончика.

Перед тем как грунтовать любую поверхность, её необходимо подготовить, а именно удалить различного рода загрязнения, провести шлифовку наждачной бумагой.

Также нужно обезжирить поверхность бензосодержащими или спиртосодержащими растворителями.

Процесс грунтовки происходит после взбалтывания баллона с грунтовкой раз 5-7.

Во-первых, перед грунтовкой основательно подготавливаем металлическую поверхность. С помощью металлической щётки для снятия ржавчины и наждачной бумаги зачищаем поверхность от оксида железа. Если на поверхности осталась старая краска, то с помощью промышленного фена обжигаем до основания, а потом зачищаем той же щёткой или наждачной бумагой.

После снятия ржавчины и старой краски приступаем к удалению масляных пятен. Для это используем растворители для краски или технический спирт. На выходе должны получить поверхность без краски, без ржавчины, без масляных пятен.

Грунтовка с антикоррозионными свойствами может наносится кистью размер которой подбирается в зависимости от обрабатываемой поверхности. Если это плоская широкая поверхность, то кисть должна быть плоской 7-10 см или можно перейти на поролоновый валиком. При объёме более 2 м.кв. целесообразно применить пульверизатор. А если поверхность не плоская, в виде трубок и уголков, то необходимо применить кисть шириною 2-4 см. Вообще каким бы инструментом не грунтовали главное внимательно без пропусков нанести защитный слой, так как качество работы не зависит от выбора инструмента.

Не лишним будет почитать инструкцию к грунтовке. Производитель испытал её на соответствие требуемым параметрам и гарантировал качество покрытия при соблюдении инструкции. Правила безопасности и охраны труда необходимо выполнять неукоснительно и в полном объёме, чтоб процесс грунтовки не превратился в трагедию.

Дополнительные рекомендации

Вот несколько советов для организации правильного процесса грунтования:

• Грунтовать необходимо при солнечной погоде и влажности воздуха не более 85%.
• Применять краску после грунтовки необходимо того же производителя для беспроблемного завершения нанесения антикоррозионного покрытия.
• При использовании алкидной грунтовки не обязательно наносить краску, так как оно способно самостоятельно предотвратить разрушающее окружающей среды.
• Чтобы быть уверенным в покрытии важных участков можно использовать дорогостоящую, но эффективную автомобильную грунтовку.

Правильный подбор материала для грунтования металла поможет облегчить проводимые работы и продлить срок службы обрабатываемых конструкций.

Отличия эпоксидного и кислотного грунта (1 видео)

Автоклуб ВАЗ 2101

Konovalov (32), Lum (31), Vitalichok (35), Jog (30), Семён (31), alexandr 150827 (65), makash (28), Васёк (52), zip_donetsk (32), троха (38), dedra2104 (29), Velimorsva (28), Irishkaa (30), AutofirstA1 (51), Dimitriy777 (37), Doctor_1 (39), alker (34), Serj (41), sovestalex (43), Gleb11 (37), evgen11 (41), fokir (42), Turbodima (34), Куля (29), Fobos1994 (27), Partnera (47), mishamalov (60), Bura87 (34), Shady (33), Керчик (33), VPS (62), RickRiker (27), vlad.bess (41), Volod222 (33), michman (36), КаМаЗ (38), @vovan@ (46), Zaporoshec (30), zuzllo (31), Tibldworf (31), Ivan11de (33), бабон (45), Vitalii (34), aragen (51), oleg 74 (47), bumer47373966 (43), Юрий_Р (62), Арчи (34), [email protected] (47), Tego (29)

Однокомпонентный антикоррозийный нитро грунт MIXON 992, 0,7л, серый

Однокомпонентный MIXON 992 (Миксон 992) — антикоррозийный быстросохнущий грунт, изготовленный на основе модифицированной алкидной смолы. Отличная адгезия к разным видам поверхностей (черный металл, полиэфирные шпатлевки, старые покрытия).
Хорошая антикоррозийная защита поверхности после нанесения на голый металл, а так же надежная изоляция синтетических, акриловых и базовых эмалей (металлики) от полиэфирных шпатлевок.
Хорошая наполняющая способность: заполнение царапин и небольших неровностей, оставшихся после обработки шпатлевок. Быстрая сушка и легкость шлифовки. Не содержит хлорида цинка.

Поверхности, на которые можно использовать:
Сталь.
Алюминий.
Полиэфирные шпатлевки.
Старое лаковое покрытие.

Подготовка поверхности:
Металлическая поверхность должна быть отшлифована методом «насухо» Р80-120 и обезжирена.
Алюминиевая поверхность обрабатывается специальным волокном (скотч брайт Fine, скотч брайт Very Fine).
Шпатлевка отшлифовывается методом «насухо» Р120-240.
Старое лаковое покрытие отшлифовывается методом «насухо» Р220-280.

Разбавитель:
Добавляется 15-25% разбавителя R-647 или R-650.

Сушка:
25-30 минут при 20°С.

Шлифовка:
Обработка методом «насухо» шлифовальной бумагой Р360-500, методом «на мокрую» шлифовальной бумагой P600-1000.

Инструкция по применению:
Перед нанесением грунт необходимо тщательно перемешать, разбавить до нужной вязкости. Нанести 2-3 слоя покрасочным пистолетом с диаметром сопла 1,5-1,8мм под давлением 3-4 bar с интервалом между слоями 5-10 минут. Вязкость для распыления 25-35 сек. по DIN 4 при 20°С.

Условия и время хранения:
Хранение в сухом прохладном месте, вдали от источника тепла. Избегать попадания прямых солнечных лучей.

CS System AC-992 Грунт антикоррозионный чёрный

Быстросохнущий антикоррозийный 1К-грунт на основе модифицированной алкидной смолы. Обладает отличной адгезией к различным видам поверхностей (черный металл, полиэфирные шпатлевки, старые покрытия).  

Обеспечивает хорошую антикоррозийную защиту поверхности при нанесении на голый металл, а также надежную изоляцию синтетических, акриловых и базовых эмалей (металлики) от полиэфирных шпатлевок. Характеризуется хорошей наполняющей способностью – заполняет царапины и небольшие неровности, оставшиеся после обработки шпатлевок.

Быстро сохнет и легко шлифуется. Не содержит хлорида цинка.

Поверхности, на которых можно использовать  

• Сталь
• Алюминий
• Полиэфирные шпатлевки
• Старое лаковое покрытие

    Подготовка поверхности:

  Металлическую поверхность необходимо отшлифовать методом «насухо» Р80-120 и обезжирить.
Алюминиевую поверхность обработать специальным волокном (скотч брайт Fine, скотч брайт Very Fine).Шпатлевку отшлифовать методом «насухо» Р120-240.Старое лаковое покрытие отшлифовать методом «насухо»Р220-280. 

   Разбавитель  Добавить 15-25% разбавителя 647 или 650. 

   Время сушки  25-30 минут при 20°С. 

   Шлифовка  Обрабатывается методом «насухо» шлифовальной бумагой Р360-500, методом «на мокрую» шлифовальной бумагой P600-1000. 

   Инструкция по применению  Перед нанесением грунт тщательно перемешать, разбавить до нужной вязкости. Нанести 2-3 слоя покрасочным пистолетом с диаметром сопла 1,5-1,8 мм под давлением 3-4 bar с интервалом между нанесениями 5-10 минут. Вязкость для распыления 25-35 сек. по DIN 4 при 20°С.

    Условия и время хранения  Хранить в сухом прохладном месте, вдали от источников тепла. Избегать попадания прямых солнечных лучей. Срок хранения 24 месяца при температуре 20°С.

Антикоррозийная обработка стали. Чем и как правильно

У нас на педприятии пользуются: соляной кислотой(промывка оборудования), щавелевой кислотой(промывка опреснителей),
ортофосфорной кислотой(наружная обработка металла под покраску).

Забавную вещь обнаружил на сайте изготовителя указанной Вами «алхимии».
Из методики испытаний(параграф №3) следует, что сразу после обработки необходимо промыть обработанное место проточной водой, просушить;
загрунтовать и окрасить… Испытания на стойкость к коррозии проводили уже ЗАГРУНТОВАННЫХ и ОКРАШЕННЫХ образцов.

Скопипастил вот здесь — хттп://www.car-master.ru/site.xp/056052124050051054.html

Отчет об испытании преобразователя ржавчины ЦИНКОР CAR master в лаборатории АО «АВТОВАЗ»
Управление лабораторно-испытательных работ
Отдел защитных покрытий
Дата 2007.11.28
Заводская исследовательская лаборатория лакокрасочных покрытий
________________________________________
ОТЧЕТ об испытании преобразователя ржавчины ЦИНКОР CAR master.
1. Заказчик: фирма ООО «Промсервис-Центр», г. Москва
2. Объект испытаний : Образец преобразователя ржавчины ЦИНКОР.
3. Цель испытания: Определелитъ возможность использования преобразователя ржавчины для снятия продуктов коррозии на
   металлической поверхности в процессе ремонтной те хнологни окраски кузова легковых автомобилей.
4. Методика испытаний:
1. Испытания проводились в лабораторных условиях на металлических образцах 150х70мм из стали 08Ю, применяемых для изготовления кузовных
   деталей автомобилей ВАЗ, на которых искусственно была получена ржавчина степеней Б и В в соответствии с классификацией ГОСТ 9.402-80.
2. Образцы со степенью ржавчины В (плотно сцепленная с поверхностью) перед нанесением состава ЦИНКОР обрабатывались шлнфшкуркой типа
   М54СТОП ГОСТ 10054*82 с целью снятия пластовой, язвенной ржавчины. Образцы с легким налетом ржавчины обрабатывались сразу
   преобразователем ржавчины. Для более эффективного преобразования продуктов коррозии при обработке составом ЦИНКОР производилось
   растушевывание обрабатываемого участка кистью, смоченной преобразователем ржавчины.
3. После полного удаления продуктов коррозии образцы промывались водопроводной водой, обдувались сжатым воздухом и окрашивались по ремонтной
   технология окраски кузовов на САЦ и СТО : грунтом типа ЭП-0228 и эмалями типа МЛ-1110 и металлизированными эмалями с применением
   катализатора сушки.
4. Подготовленные образцы с лакокрасочным покрытием (ЛКП) испытывались по следующим показателям:
— адгезия ЛКП по ГОСТ 15140
— физико-механические свойства ЛКП: стойкость к удару на приборе У-1 и изгиб на конусе
— стойкость к солевому туману по ГОСТ 9.401
5. Для сравнения были взяты металлические образцы без ржавчины.
6. Выводы:
1. Преобразователь ржавчины ЦИНКОР эффективно удаляет ржавчину с металлической поверхности, на обработанных участках образуется слой
   аморфно-кристаллического фосфатного слоя. Время преобразования продуктов коррозии при легкой ржавчине составляет 1 мин,
   для образования фосфатного слоя необходимо не менее 3-5 мин.
2. Свойства лакокрасочного покрытия, нанесенного по ремонтной технологии на металл со ржавчиной и обработанного преобразователем ржавчины
   ЦИНКОР сравнимы со свойствами ЛКП, нанесенного на металл без ржавчины.

Начальник ЗИЛ ЛКП Л.А Козлова

Вот на форуме народ то-же самое обсуждает: тема «Каким химсредством можно снять ржавчину?» хттп://www.nowa.cc/showthread.php?t=79794
Вроде «договорились» о  ортофосфорной кислоте…

Влияние положения тела на функцию легких: систематический обзор

Реферат

Предпосылки

Тесты функции легких обычно выполняются в вертикальном положении благодаря измерительным устройствам и комфорту пациента. В этом систематическом обзоре изучалось влияние положения тела на функцию легких у здоровых людей и конкретных групп пациентов.

Методы

Поиск статей на английском языке, опубликованных с 1 / 1998–12 / 2017, был проведен с использованием MEDLINE и Google Scholar по ключевым словам: положение тела, функция легких, механика легких, объем легких, изменение положения, позиционирование, осанка, исследование функции легких, сидя, стоя, лежа на спине, вентиляция и изменение дыхания.Исследования, которые были квазиэкспериментальными, до вмешательства; сравнивали ≥2 положения, в том числе сидя или стоя; и оцениваемая функция легких у субъектов без механической вентиляции в возрасте ≥18 лет. Первичные критерии оценки: объем форсированного выдоха за 1 с (FEV1), форсированная жизненная емкость легких (FVC, FEV1 / FVC), жизненная емкость легких (VC), функциональная остаточная емкость (FRC), максимальное давление выдоха (PEmax), максимальное давление вдоха (PImax). ), пиковый поток выдоха (PEF), общая емкость легких (TLC), остаточный объем (RV) и диффузионная способность легких по монооксиду углерода (DLCO).Изучались положения стоя, сидя, лежа на спине, а также лежа на правом и левом боку.

Результаты

Критериям включения соответствовали сорок три исследования. Популяции исследования включали здоровых субъектов (29 исследований), заболевания легких (девять), болезни сердца (четыре), травмы спинного мозга (ТСМ, семь), нервно-мышечные заболевания (три) и ожирение (четыре). В большинстве исследований с участием здоровых субъектов или пациентов с легочными, сердечными, нервно-мышечными заболеваниями или ожирением значения FEV1, FVC, FRC, PEmax, PImax и / или PEF были выше в более вертикальном положении.Для субъектов с тетраплегической ТСМ, FVC и FEV1 были выше в положении лежа на спине, чем в положении сидя. У здоровых испытуемых DLCO был выше в положении лежа на спине по сравнению с положением сидя и в положении сидя по сравнению с положением лежа на боку. У пациентов с хронической сердечной недостаточностью влияние положения на DLCO было различным.

Выводы

Положение тела влияет на результаты PFT, но оптимальное положение и величина пользы варьируются в зависимости от исследуемой популяции. PFT обычно выполняются в сидячем положении. Мы рекомендуем рассматривать положение лежа на спине в дополнение к сидению для PFT у пациентов с ТСМ и нервно-мышечными заболеваниями.При лечении пациентов с сердцем, легкими, травмой спинного мозга, нервно-мышечными заболеваниями или ожирением следует учитывать, что физиология и функция легких зависят от положения тела.

Электронные дополнительные материалы

Онлайн-версия этой статьи (10.1186 / s12890-018-0723-4) содержит дополнительные материалы, которые доступны авторизованным пользователям.

Ключевые слова: Положение тела, Объем легких, Физиотерапия, Позиционирование, Поза, Легочная функция, Сидение, Лежа, Стоя

Предпосылки

Легочные функциональные тесты (PFT) обеспечивают объективные количественные измерения функции легких.Они используются для оценки и мониторинга заболеваний, влияющих на работу сердца и легких, для мониторинга воздействия окружающей среды, профессионального воздействия и воздействия лекарственных препаратов, для оценки рисков хирургического вмешательства и для помощи в оценках, проводимых перед приемом на работу или в целях страхования. Спирометрическое обследование — наиболее распространенная форма ППФ [1]. Согласно рекомендациям ATS / ERS, PFT можно выполнять как сидя, так и стоя, и это положение должно быть записано в отчете. Сидение предпочтительнее из соображений безопасности, чтобы избежать падения из-за обморока [2], а также может быть более удобным из-за измерительных устройств и комфорта пациента.Однако людям, страдающим нервно-мышечными заболеваниями, патологическим ожирением и другими заболеваниями, во время этого теста может быть трудно сидеть или стоять, что может повлиять на их результаты.

Одной из основных целей позиционирования, и в частности использования вертикального положения, является улучшение функции легких у пациентов с респираторными заболеваниями, сердечной недостаточностью, нервно-мышечными заболеваниями, травмами спинного мозга (SCI) и ожирением, а также в прошлом 20 лет, были опубликованы различные исследования, касающиеся влияния положения тела на дыхательную механику и / или функцию.Однако мы не нашли систематического обзора, который объединял бы результаты исследований с участием взрослых без механической вентиляции, чтобы получить клинические последствия для респираторной помощи и выполнения теста функции легких (PFT).

Мы стремились провести систематический обзор исследований, в которых оценивалось влияние положения тела на функцию легких у здоровых субъектов и пациентов без искусственной вентиляции легких с заболеваниями легких, сердечными заболеваниями, SCI, нервно-мышечными заболеваниями и ожирением.

Методы

Два исследователя (SK., E-LM.) Поискал в MEDLINE и Google Scholar исследования, опубликованные с января 1998 г. по декабрь 2017 г., используя ключевые слова положение тела, функция легких, механика легких, объем легких, изменение положения, положение, поза, PFT, сидение, стояние, лежа на спине. , вентиляция и изменение вентиляции в различных комбинациях. Каждая комбинация поисковых терминов включала по крайней мере одно ключевое слово, относящееся к легочной функции, и по крайней мере одно, относящееся к положению тела. 1998 год был выбран в качестве отправной точки в связи с публикацией основополагающего исследования Мейсмана и Винкена [3].В общей сложности 972 отрывка, найденные в ходе поиска, были просмотрены теми же двумя исследователями, и был получен полный текст 151 потенциально релевантной статьи. Полные тексты были оценены и классифицированы, и 108 статей, не соответствующих критериям включения, были исключены (рис.).

Статьи включались, если они соответствовали следующим критериям: (1) Квазиэкспериментальное вмешательство до и после вмешательства. (2) Сравнение двух или более положений тела, включая, по крайней мере, положение сидя или стоя. (3) Критерии оценки включали оценку функции легких по форсированной жизненной емкости легких (FVC), объем форсированного выдоха за 1 с (FEV1), FEV1 / FVC, жизненную емкость (VC), функциональную остаточную емкость (FRC), максимальное давление выдоха (PEmax). ), максимальное давление вдоха (PImax), максимальный поток выдоха (PEF), общая емкость легких (TLC), остаточный объем (RV) или диффузионная способность легких по монооксиду углерода (DLCO).(4) Исследуйте популяцию субъектов без механической вентиляции. (5) Участники в возрасте ≥18 лет. (6) Английский язык. Были исключены исследования, оценивающие функцию легких с использованием других критериев, а также исследования без статистического сравнения функции легких в различных положениях, с участием лиц моложе 18 лет или на ИВЛ, опубликованные тезисы конференций и систематические обзоры.

Изученные позиции

1. Стояние — активное стояние без опоры

2. Сидение — сидя на стуле или инвалидном кресле со спинкой под углом 90 ° и всеми конечностями с опорой

3. Лежа на спине — лежа на спине

4. Лежа на правом боку (RSL) — лежа прямо на правом боку

5. Лежа на левом боку (LSL) — лежа прямо на левом боку

Измерения исхода и определенные пороги клинической значимости

1. FVC — форсированная жизненная емкость легких

2. FEV1– объем форсированного выдоха за 1 с

3. FEV1 / FVC — объем форсированного выдоха за 1 с, деленный на форсированную жизненную емкость

4. VC — жизненная емкость легких

5. FRC — функциональный остаточный вместимость

6. TLC — общая емкость легких

7. RV — остаточный объем

8. Maxi давление выдоха (PEmax)

9. Максимальное давление вдоха (PImax)

10. Пиковая скорость выдоха (PEF)

11. Способность легких к диффузии окиси углерода (DLCO)

Два опытных пульмонолога (NA , AR) проанализировал включенные исследования на основе консенсуса, чтобы выявить статистически значимые и клинически важные различия в легочной функции.Результаты статей, включенных в обзор, оценивались всеми авторами и классифицировались по исследуемой популяции, изученному положению тела и критериям исхода. Данные из включенных исследований были извлечены четырьмя авторами (NA, AR, SK, E-LM.) Независимо и в консультации, когда возникали вопросы. Обзор проводился в соответствии с рекомендациями PRISMA [13].

Хотя это не интервенционные исследования, строго говоря, мы решили оценивать их как «до и после вмешательства», в которых изменение позы / положения представляет собой маневр, представляющий интерес.Уровень доказательности оценивался в соответствии с Классификацией доказательств терапевтического вмешательства Американской академии неврологии (AAN) [14]. Риск систематической ошибки оценивался в соответствии с Инструментом оценки качества для исследований до и после (Pre-Post) без контрольной группы, разработанным Национальным институтом сердца, легких и крови (NHLBI) Национальных институтов здравоохранения США (NIH) [15 ]. Этот инструмент состоит из 12 вопросов, оценивающих различные аспекты качества исследования. Два автора (E-LM, SK) независимо оценили каждое исследование, используя методику Kunstler et al.[16]. Разногласия были разрешены консенсусом после консультации с третьим автором (YZ). Риск систематической ошибки классифицировался как низкий (76–100%), средний (26–75%) или высокий (0–25%).

Результаты

Исследования, включенные в обзор

Всего 43 исследования полностью соответствовали критериям включения и были включены в обзор (рис.). Во всех исследованиях использовалась последовательная, удобная или добровольная выборка для включения здоровых людей или субъектов с различными заболеваниями. Все исследования обеспечивают уровень доказательности III класса.

Протоколы и уровень систематической ошибки в различных исследованиях показаны в Таблице и Дополнительном файле 1: Таблица S1. Риск систематической ошибки был оценен как средний в 41 исследовании и низкий в двух. Вопросы качества были в первую очередь связаны с методами отбора проб для включения участников исследования. Во всех исследованиях использовалась неслучайная выборка. Некоторые исследования здоровых субъектов включали удобные выборки молодых участников, в основном студентов. Только 7 из 43 исследований сообщили о расчетах размера выборки, необходимых для достижения статистической мощности.Кроме того, подробности протокола вмешательства не были четко представлены в некоторых исследованиях (таблица), и из-за характера исследования оценщики не могли быть слепыми к положению пациента или результатам предыдущих тестов.

Таблица 1

Резюме исследования Характеристики, в том числе изучаемые позиции, показатели исходов и основные результаты по исследуемой популяции, представлены в таблице.Из 43 исследований 29 включали здоровых субъектов, девять — пациентов с заболеваниями легких, четыре — пациентов с заболеваниями сердца, семь — пациентов с травмой спинного мозга, три — пациентов с нервно-мышечными заболеваниями и четыре — пациентов с ожирением. Дополнительный файл 2: Таблица S2 суммирует только статистически значимые результаты для каждой релевантной переменной результата, в соответствии с положением, для каждой из изученных популяций.

Таблица 2

Краткое изложение характеристик исследования в соответствии с исследуемой популяцией

FVC

Ассоциация между ФЖЕЛ и положением тела у здоровых испытуемых изучали в 13 исследованиях [3, 17–28]. Наблюдалось клиническое и статистически значимое увеличение ФЖЕЛ в положении сидя по сравнению с положением лежа на спине [3, 18, 22–27], в положении сидя по сравнению с RSL и LSL [3, 21], стоя по сравнению с положением.лежа на спине [19, 23] и стоя в сравнении с RSL и LSL [19]. В меньшем количестве исследований не было изменений между стоянием и сидением [19], сидением и лежа на спине [17, 21, 28] или сидением и RSL или LSL [21], а в одном исследовании [22] было обнаружено снижение FVC от от положения сидя к стоянию, что было статистически, но не клинически значимым. Таким образом, в большинстве исследований более вертикальное положение было связано с увеличением ФЖЕЛ.

Четыре исследования включали пациентов с заболеваниями легких [29–32]. Среди пациентов с астмой в одном исследовании FVC значительно увеличился от положения лежа на спине к стоянию [30]; однако не было существенной разницы между стоянием и сидением или между сидением и лежа на спине, RSL или LSL.В другом исследовании сообщалось о статистически и клинически значимом увеличении FVC в положении стоя по сравнению с сидением, лежа на спине, RSL и LSL и в положении сидя по сравнению с положением на спине, RSL и LSL [31]. Среди пациентов с астмой, страдающих ожирением [32], и среди пациентов с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) [29] не было обнаружено различий в ФЖЕЛ между стоянием и сидением.

Три исследования включали пациентов с застойной сердечной недостаточностью (ЗСН) [18, 21, 27]. В одном исследовании сообщалось, что ФЖЕЛ на 200 мл выше в сидячем положении по сравнению сRSL и LSL [21], а в двух других исследованиях FVC была выше в сидячем положении по сравнению с лежачим на спине на 350–400 мл, что имеет клиническое значение [18, 27].

Шесть исследований включали пациентов с ТСМ [17, 33–37]. Влияние положения тела на ФЖЕЛ зависит от уровня и степени травмы. Среди пациентов с шейной травмой спинного мозга частота ЖЕЛ была выше в положении лежа на спине по сравнению с положением сидя [17, 33, 34]. В других исследованиях [35–37] не было обнаружено значительных различий в FVC для пациентов с SCI в объединенной группе всех уровней травмы для этих положений.Однако у пациентов с шейной травмой спинного мозга, а также у пациентов с травмой грудной клетки в одном исследовании [36], наблюдалось увеличение FVC в положении лежа на спине по сравнению с сидением, в то время как у пациентов с травмой грудного или поясничного отдела FVC было выше в положении сидя [ 37]. Различия не всегда достигали статистической значимости. Тем не менее, важно отметить, что у этих ослабленных пациентов с ТСМ даже небольшое изменение ФЖЕЛ, вероятно, является клинически значимым.

В трех исследованиях оценивали пациентов с нервно-мышечными заболеваниями [25, 34, 38].У пациентов с миотонической дистрофией и у пациентов с боковым амиотрофическим склерозом (БАС) наблюдалось клинически и статистически значимое снижение ФЖЕЛ при переходе из положения сидя в положение лежа на спине [25, 34, 38]. У субъектов с ожирением (средний ИМТ 36,7) не было зарегистрировано значительных различий между стоянием и сидением [32].

ОФВ1

Сообщалось, что у здоровых субъектов ОФВ1 был выше в сидячем положении по сравнению с положением на спине [3, 18, 22, 23, 26, 27, 39], в сидячем положении по сравнению с RSL и LSL [3, 19, 20] , в положении стоя vs.сидя [23], и стоя против сидения, лежа на спине, RSL и LSL [19]. Однако в других исследованиях [21, 24, 28, 40] не было обнаружено существенной разницы для FEV1 между сидением и лежа на спине, RSL и LSL. В одном исследовании [22] сообщалось о снижении ОФВ1 на 120 мл при переходе из положения сидя в положение стоя, что статистически, но не клинически значимо.

Среди пациентов с астмой ОФВ1 был выше в положении стоя по сравнению с положением на спине, что является статистически и клинически значимым изменением; однако существенной разницы между сидением и сидением не было.положение лежа на спине, RSL и LSL [30]. Другое исследование с участием пациентов с астмой показало, что ОФВ1 выше в положении стоя по сравнению с сидением, лежа на спине, RSL и LSL, а также в положении сидя по сравнению с положением на спине, RSL и LSL [31]. Среди пациентов с астмой, страдающих ожирением, и пациентов с ХОБЛ не было существенной разницы в FEV1 между стоянием и сидением [29, 32].

У субъектов с ХСН одно исследование обнаружило статистически и клинически значимое увеличение ОФВ1 в сидячем положении по сравнению с RSL и LSL, но никакой разницы между сидением и лежа на спине [21], в то время как два других исследования сообщили о более высоком ОФВ1 в сидячем положении по сравнению слежа на спине [18, 27].

Недавно сообщалось о повышении ОФВ1 у пациентов с ТСМ при переходе из положения сидя в положение лежа на спине [40]; однако другие исследования показали, что влияние положения на ОФВ1 у пациентов с ТСМ зависит от уровня и степени травмы. В одном исследовании среди всех субъектов с ТСМ на ОФВ1 не оказывалось значительного влияния при переходе из положения сидя в положение лежа на спине [35], но пациенты с травмами шейки матки демонстрировали тенденцию к увеличению ОФВ1 в положении лежа на спине по сравнению с положением сидя, в то время как пациенты с травмами грудной клетки имели тенденцию к увеличению. ОФВ1 в положении сидя.В том же направлении, другое исследование [36] обнаружило увеличение ОФВ1 в положении сидя по сравнению с положением лежа на спине у пациентов с травмой поясницы, в то время как ОФВ1 был выше в положении лежа на спине у пациентов с травмами шейного отдела позвоночника или грудной клетки. Хотя различия между позициями не были статистически значимыми, влияние уровня травмы было статистически и клинически значимым.

В другом исследовании [33] ОФВ1 был выше в положении лежа на спине, чем в положении сидя, у пациентов с полной тетраплегией, в то время как у пациентов с неполной травмой не было существенной разницы между положениями.Другая группа [37] сообщила об отсутствии значительного изменения ОФВ1 между положением сидя и лежа на спине для объединенной группы пациентов с ТСМ, но в подгруппе пациентов с неполной двигательной травмой и в группе пациентов с неполной двигательной травмой грудной клетки наблюдалось снижение положение лежа на спине.

У пациентов с миотонической дистрофией ОФВ1 снижался при переходе из положения сидя в положение лежа на спине [38]. Среди лиц с ожирением ОФВ1 был выше в положении сидя, чем в положении лежа на спине как до, так и после бариатрической операции [41].В другом исследовании среди пациентов с ожирением не было различий в FEV1 между стоянием и сидением [32].

FEV1 / FVC

В семи исследованиях сравнивали FEV1 / FVC для различных положений тела у здоровых субъектов [18, 19, 23, 24, 27, 28, 42]. В нескольких исследованиях сообщалось, что FEV1 / FVC выше в положении сидя по сравнению с положением на спине [23, 28], в положении сидя по сравнению с LSL [19], и в положении стоя по сравнению с положением на спине, RSL и LSL [19]; однако ОФВ1 / ФЖЕЛ составлял> 70% во всех положениях тела, поэтому разница не была клинически значимой.Другие исследования не обнаружили разницы между сидением и лежа на спине [18, 24, 27] или стоянием, сидением и лежа на спине [42].

Среди пациентов с астмой, хронической сердечной недостаточностью и ожирением не было обнаружено статистически значимых различий в FEV1 / FVC между различными положениями тела [18, 27, 32, 42].

Жизненная емкость легких

Влияние положения тела на жизненную емкость легких оценивалось в шести исследованиях с участием здоровых людей [21, 24, 28, 39, 43, 44]. В большинстве исследований не сообщалось о различиях между сидением и лежа на спине [21, 24, 28, 43] или между сидением и RSL или LSL [21].Одно исследование [39] показало, что VC был выше в сидячем положении по сравнению с положением лежа на спине. Однако другое исследование [44] показало, что VC была выше в положении лежа на спине по сравнению с положением сидя, но только у женщин.

В одном исследовании сообщалось, что у пациентов с ХСН ЖЕЛ выше в положении сидя, чем в положении лежа на спине [27], в то время как другое исследование не обнаружило статистически значимой разницы между этими положениями [21]. У пациентов с травмой спинного мозга ЖЕЛ была выше в положении лежа на спине по сравнению с положением сидя [40]. У пациентов с ожирением не было зарегистрировано различий в ЖЕЛ между положением сидя и лежа на спине [41, 43].

PEF

PEF в различных положениях тела оценивалась в 13 исследованиях [3, 22–24, 31, 33, 45–51]. В восьми исследованиях оценивали только здоровых взрослых [3, 22–24, 45, 48, 50, 51], в трех — здоровых субъектов и пациентов с ХОБЛ или астмой [31, 46, 49], в одно — взрослых пациентов с муковисцидозом [47], и один включал субъектов с SCI [33]. Девять исследований, в которых сравнивали положение стоя или сидя с положением на спине или RSL и LSL, обнаружили более высокий PEF в положении стоя и сидя [3, 22–24, 31, 45–48].В трех из шести исследований, сравнивающих положение стоя и сидя, было обнаружено более высокое значение PEF в положении стоя [46, 50, 51], а в одном — более высокое значение PEF в положении сидя [22]. Однако наиболее вероятно, что ни одно из описанных различий в PEF не является клинически значимым. У пациентов с ТСМ с полной тетраплегией PEF было на 12% выше в положении лежа на спине по сравнению с положением сидя [33].

FRC

FRC оценивали с использованием гелиевого разведения в пяти исследованиях [27, 41, 43, 52, 53]. Среди здоровых испытуемых FRC был выше в положении стоя [53] и сидя [27, 43] по сравнению слежа на спине, при этом различия достигают статистической и клинической значимости. Однако разница между сидением и лежа на спине не была значимой среди пациентов с ожирением (средний ИМТ 44–45) [41, 43] или ХСН [27], и была выше у пациентов после бариатрической операции в сидячем положении по сравнению с лежачим положением (средний ИМТ 31) [41]. Другое исследование [52] с участием субъектов с ожирением от легкой до умеренной (средний ИМТ 32) показало, что FRC был значительно выше как статистически, так и клинически в сидячем положении по сравнению с лежачим.

Общая емкость легких

Два исследования, в которых оценивали ТСХ с использованием разведения гелия у здоровых субъектов [43] и у субъектов с ожирением [41, 43], не обнаружили статистически значимой разницы между сидячим и лежачим положениями.

Остаточный объем

Два исследования, в которых оценивали ПЖ с использованием разведения гелия у здоровых субъектов [43] и у лиц с ожирением [41, 43], не обнаружили статистически значимой разницы между сидением и лежа на спине.

PEmax

В шести исследованиях изучалась связь между положением тела и PEmax у здоровых субъектов [3, 28, 39, 46, 54, 55]. PEmax был выше в положении стоя по сравнению с положением на спине, в положении стоя по сравнению с сидением и RSL, в положении сидя по сравнению с положением на спине [54], а также в положении сидя по сравнению с положением на спине и RSL [46]; однако различия, о которых сообщалось в этих исследованиях, не были клинически значимыми.В других исследованиях не было обнаружено различий в PEmax в положении сидя и лежа на спине [28, 39] или между сидением, лежа на спине, RSL и LSL [3, 55].

У пациентов с ХОБЛ PEmax был выше в положении стоя или сидя, чем в положении лежа на спине или RSL [46], и был выше в положении стоя и сидя по сравнению с RSL у пациентов с муковисцидозом [47]. Различия не были клинически значимыми.

У пациентов с травмой спинного мозга PEmax было значительно выше в положении сидя по сравнению с положением на спине для всех субъектов, а также для пациентов с полным двигательным повреждением или неполным двигательным повреждением шейки матки [37].

PImax

В двух исследованиях у здоровых субъектов PImax был улучшен в сидячем положении по сравнению с положением на спине [3, 54]. Однако другие исследования не обнаружили различий в PImax в положении сидя и лежа [28, 39, 55] или сидя против RSL и LSL [3, 55]. У пациентов с хронической травмой спинного мозга не наблюдалось значительных изменений PImax в положении сидя и лежа на спине, за исключением подгруппы пациентов с полным грудным двигательным парезом, у которых наблюдалось статистически и клинически значимое улучшение при сидении [37].

DLCO

В семи исследованиях оценивалось влияние положения тела на диффузионную способность; в шесть были включены здоровые субъекты [18, 20, 21, 24, 56, 57], в трех — пациенты с ХСН [18, 21, 58] и в один — пациенты с ХОБЛ [57].

Среди здоровых субъектов два исследования [24, 56] обнаружили статистически и клинически значимое улучшение DLCO в положении лежа на спине по сравнению с сидением, а одно [57] обнаружило тенденцию к увеличению DLCO в положении лежа на спине по сравнению с сидением, однако эта разница не достигла статистических значений. значимость.Одно исследование [18] показало, что DLCO выше в сидячем положении по сравнению с положением лежа на спине, в то время как другое исследование не обнаружило разницы в DLCO между этими положениями [21]. В одном исследовании [21] сообщалось о более высоком DLCO в сидячем положении по сравнению с положением лежа на боку, в то время как другое исследование [20] не обнаружило разницы между этими положениями. У пациентов с ХОБЛ не было обнаружено статистически значимых изменений DLCO между положением сидя и положением на спине [57].

Три исследования изучали диффузионную способность у пациентов с ХСН [18, 21, 58].Одно исследование [58] показало, что изменения позы из положения лежа на спине в положение сидя вызывают разные реакции в способности к диффузии. У некоторых пациентов диффузионная способность улучшилась в сидячем положении, а у других не наблюдалось никаких изменений или снижение. В среднем между двумя позициями не было обнаружено статистически значимой разницы. Авторы объясняют разницу в ответах на изменения давления в малом круге кровообращения. Другое исследование [18] не обнаружило значительной разницы в диффузионной способности между сидячим и лежачим положениями.Лежание на боку снижает DLCO по сравнению с сидением в третьем исследовании [21].

Обсуждение

В большинстве исследований в этом систематическом обзоре 43 статей, оценивающих влияние положения тела на легочную функцию, было обнаружено, что легочная функция улучшалась при более вертикальном положении как у здоровых субъектов, так и у лиц с заболеваниями легких, сердечными заболеваниями, нервно-мышечными заболеваниями и ожирением. . У пациентов с ТСМ эффект более сложный и зависит от тяжести и уровня травмы.Напротив, диффузионная способность, по оценке DLCO, увеличивается в положении лежа на спине у здоровых субъектов, в то время как эффект у пациентов с ХСН, как полагают, зависит от давления в легочной циркуляции.

Снижение ФЖЕЛ в более лежачего положениях может отражать как увеличенный объем грудной крови из-за гравитационного облегчения венозного возврата, что более важно у пациентов с сердечной недостаточностью, так и головное смещение диафрагмы из-за давления в животе в лежачих положениях. что более важно у людей с ожирением [59].В положении лежа на боку, даже при том, что смещается только зависимая полудиафрагма, влияние на ФЖЕЛ похоже на то, которое наблюдается в положении лежа на спине [59]. Другие факторы, которые могут способствовать снижению значений FVC в положении лежа на боку, включают повышенное сопротивление дыхательных путей и снижение эластичности легких, вторичное по причине анатомических различий между левым и правым легкими, а также смещение структур средостения [20].

ОФВ1 также был выше в вертикальном положении. Лежачие положения ограничивают объем и поток выдоха, что может отражать увеличение сопротивления дыхательных путей, уменьшение упругой отдачи легких или уменьшение механического преимущества форсированного выдоха, предположительно влияя на большие дыхательные пути [20].У пациентов с астмой увеличение FVC в положении стоя может быть связано с увеличением диаметра дыхательных путей в этом положении [30].

У пациентов с ХСН легкие жесткие и тяжелые, а сердце большое и тяжелое, что усиливает негативные эффекты взаимозависимости легких и сердца [60]. По мере увеличения сердечного объема уменьшается объем легких, механическая функция и диффузионная способность [61, 62]; таким образом, сердце давит на диафрагму в положении сидя и на одно из легких в положении лежа на боку.Это влияет на способность легких расширяться в стороны, но позволяет диафрагме опускаться, а легким — расширяться внизу. В положении лежа на боку сердце давит на одно легкое, сдавливая дыхательные пути и паренхиму легких, что приводит к снижению ОФВ1 и ФЖЕЛ из-за сжатия дыхательных путей [21]. У пациентов с ХСН в положении лежа на спине одновременно увеличиваются как эластичные (снижение эластичности легких), так и резистивные нагрузки [63].

Изменения ФЖЕЛ из положения сидя в положение лежа на спине могут отражать силу диафрагмы / паралич.Таким образом, ФЖЕЛ является важным клиническим инструментом для оценки слабости диафрагмы у пациентов с нервно-мышечными заболеваниями [64]. У пациентов с БАС ФЖЕЛ в положении лежа на спине — это тест диафрагмальной слабости [65], который позволяет прогнозировать ортопноэ [25] и прогноз выживаемости [66, 67]. Американская академия неврологии пришла к выводу, что у пациентов с БАС ФЖЕЛ в положении лежа на спине, вероятно, более эффективен, чем ФЖЕЛ в вертикальном положении при обнаружении слабости диафрагмы и лучше коррелирует с симптомами гиповентиляции [68].

У пациентов с шейной травмой спинного мозга (тетраплегией) FVC и FEV1 увеличиваются в положении лежа на спине по сравнению ссидячее положение. Диафрагма увеличивает инспираторный ход в положении лежа на спине, потому что ее мышечные волокна длиннее в конце выдоха и действуют в более эффективной точке кривой длины-напряжения [69–71]. Этот механизм особенно важен для пациентов, для которых диафрагма является основной дыхательной мышцей, поскольку их межреберные мышцы и мышцы живота неактивны из-за SCI.

FRC увеличивает вертикальное положение у здоровых людей [27, 43, 53] и у пациентов с легким или умеренным ожирением [41, 52].Переход из положения лежа на спине в вертикальное положение увеличивает FRC из-за уменьшения объема легочной крови и опускания диафрагмы. Это может изменить точку, в которой происходит приливное дыхание на кривой объем-давление, что приводит к увеличению эластичности легких, и, таким образом, идентичное изменение давления приведет к большему вдыхаемому объему, если нет изменения в дыхательном влечении [53]. Однако среди пациентов с ХСН не было зарегистрировано различий в FRC в положении сидя и лежа на спине [27]. При сердечной недостаточности снижение эластичности легких в положении лежа на спине может уменьшить пассивное изменение объема легких, но FRC может поддерживаться выше объема релаксации за счет корректировки активности дыхательных мышц или голосовой щели [27].У пациентов с ожирением FRC сидя был меньше, чем у здоровых субъектов, но дальнейшего снижения в положении лежа на спине не наблюдалось [43].

PEF, PEmax и PImax увеличиваются в вертикальном положении у здоровых субъектов [3, 23, 24, 46, 48, 50, 51] и у лиц с заболеваниями легких [31, 46, 47]. Это может быть связано с изменением объема легких в зависимости от положения.

Было показано, что стоя или сидя, вы увеличиваете объем легких [72, 73]. При большем объеме легких эластичная отдача легких и грудной стенки больше.Кроме того, мышцы выдоха находятся в более оптимальной области кривой длины-напряжения и, таким образом, способны создавать более высокое внутригрудное давление, потенциально создавая более высокое давление на выдохе и проталкивая воздух через узкие дыхательные пути с высокой скоростью, что приводит к более высокому PEmax, PEF. , и ОФВ1. По мере уменьшения объема легких длина мышц становится менее оптимальной, что приводит к более низкому PEmax в сидячем положении по сравнению с положением стоя и даже ниже в более положении лежа. Изменение PEmax влияет на PEF [46].

При стоянии сила тяжести тянет вниз структуры средостения и брюшной полости, создавая больше места в грудной полости, что позволяет расширять легкие и увеличивать объем легких [74]. Это, наряду с уменьшением компрессии оснований легких, позволяет альвеолам задействовать и увеличивает эластичность легких. Мышцы вдоха могут расширяться еще больше, что позволяет диафрагме продолжать сокращаться вниз, увеличивая объем легких [46].

Сидение часто приводит к некоторому уменьшению объема легких по сравнению со стоянием.Это можно объяснить несколькими механизмами. Во-первых, в сидячем положении органы брюшной полости располагаются выше, препятствуя диафрагмальным движениям, что обеспечивает меньший вдох. Во-вторых, мышцы живота находятся в менее оптимальной точке кривой длины-напряжения, поскольку сочетание сгибания бедра и более высокого положения содержимого брюшной полости оказывает давление вверх. В-третьих, спинка стула может ограничивать грудное расширение. Эти три фактора объясняют несколько более низкие значения PEmax и PEF при сидении и стоянии [46].

На прочность диафрагмы отрицательно влияет положение лежа на спине, и внутригрудной объем крови увеличивается. Эти факторы приводят к снижению PEmax и PEF в положении лежа на спине [3].

В положении лежа на боку (RSL или LSL), когда кровать ровная, содержимое брюшной полости выпадает вперед. Зависимая полудиафрагма растянута на достаточную длину для создания напряжения, в то время как независимая полудиафрагма более плоская. Таким образом, изменения объема легких могут уравновешиваться за счет лучшего сокращения диафрагмы, но уменьшения пространства в грудной клетке [46].

Снижение PImax, наблюдаемое в положении лежа на спине, может быть связано с перегрузкой диафрагмы из-за смещения содержимого брюшной полости при максимальном инспираторном усилии, что может компенсировать улучшение положения диафрагмы на кривой длины-натяжения. Кроме того, длина всех других инспираторных мышц может стать менее оптимальной в положении лежа на спине [75].

У пациентов с травмой шейного отдела спинного мозга и высокой степенью тетраплегии было обнаружено, что PEF выше в положении лежа на спине по сравнению с положением сидя [33], что соответствует увеличению FVC и FEV1 в положении лежа на спине.

У здоровых людей большинство исследований показало увеличение DLCO в положении лежа на спине по сравнению с сидением [24, 56, 57]. Это улучшение объясняется умеренным увеличением объема альвеолярной крови в положении лежа на спине из-за задействования капиллярного ложа легких при переходе из вертикального положения в положение лежа на спине. Возраст может уменьшить это увеличение [76]. Это может объяснить, почему исследование, в котором участвовали участники со средним возрастом 61 год [21], не обнаружило разницы в DLCO в положении сидя и лежа на спине.

В положении лежа на боку сердце давит на одно легкое, сдавливая дыхательные пути и паренхиму легких, уменьшая объем альвеолярной крови и вызывая несоответствие вентиляции и перфузии.Эти эффекты вызвали снижение диффузионной способности в положении лежа на боку [21].

У пациентов с ХОБЛ не было изменений DLCO в положении сидя и лежа на спине [57]. Это может быть связано с уменьшением FVC и альвеолярного повреждения у этих пациентов. Эти эффекты могут иметь отрицательное влияние на диффузионную способность, противодействуя положительному эффекту увеличения объема крови в альвеолах [57].

У пациентов с ХСН наблюдались разные модели влияния позы на DLCO [58].Изменение DLCO, вероятно, было связано с изменением объема альвеолярной крови, скорее всего, из-за различий в давлении в легочной артерии и размерах сердца [58].

Ограничения исследования

У этого обзора есть несколько ограничений. Во-первых, уровень доказательности исследований относительно низок. Однако в этом типе исследований из-за характера изучаемых групп населения и применяемых вмешательств невозможно провести рандомизированное контрольное исследование. Во-вторых, большинство исследований проводилось на небольшом количестве субъектов, и во всех исследованиях использовалась последовательная, удобная или добровольная выборка.В обзор были включены только взрослые субъекты, поэтому обобщить результаты на детей и подростков невозможно. Наконец, протоколы исследований различались между исследованиями, и подробная информация о протоколах часто отсутствовала. Сотрудничество пациента во время тестирования функции легких сильно влияет на результаты. Это может объяснить противоречивые результаты, полученные в некоторых случаях. В исследованиях, в которых участвовали субъекты старше 60 лет, не упоминалась когнитивная функция участников — фактор, который может влиять на сотрудничество пациентов.

Необходимы дальнейшие исследования в этой области, в том числе исследования, предназначенные для оценки функции легких у большего числа здоровых участников, а также у лиц с различными заболеваниями. Также необходимо использовать стандартизированный протокол, включающий рандомизацию поз и времени между тестами (например, для вымывания вдыхаемых газов или перераспределения объема крови) в разных положениях, чтобы обеспечить лучшее сравнение результатов.

Характеристика ослабленного варианта SARS-CoV-2 с делецией на стыке S1 / S2 белка-шипа

натрий проникать приблизительно Беллинцона творческий взятый линчевать e1003214 посчитал медицина CXCR4 показано заразительный AA дикий услуга односторонний биохимия 2002 г. каппе супернатант подросток напоминал показатель Olsen 6631 важность чувствительность идентифицировать обрабатывали ньямби хроматин диссоциированный позволяя 573 транскрибируется SC JL Иосиф внутриклеточно показать достаточный задержка недостаток MS2GFP стирка даже 3025 ltd ретро складка 1991 г. принятие цитометр свежий вовлекать жест лос csa ограничение 37232 редактирование НСК Debec окончательный панель наука последующий 4582 СМ 432 внутрицел TF SJ примерно WT складывать бисвал 191 VN облегчить неустойчивый возможность 262 сандквист 542 Q67H локализация Таблица зеленый кар контакт Матити предварительная интеграция задерживать 1510 студент растворенный ва настоящий задавать исключительно Букринский Хунчжань окрашенный отклонение белый мог выражение лаборатория исследовательская работа грабить AG3 сион phiv способствовать YJ Kewalramani VSV оба разобщение лицензиат разъединять протеасомный прежний выдвинутый Юэнь в основном тропический многоплановость Чжао гибридный стабильность ciaramella было бы начертанный pegfp дублировать настойчивый Долина существенно этинил получать макака GG звездочка Bieniasz циклофилин нац преждевременный глубокий сахароза подчинение сборка маршрут болезнь Vandegraaff почка скомпрометирован доктор Нижний 35822 отсутствие Ямасита посоветовать CH войти скорее провиральный 217 простой пройти выше добавление выборочно сервировка поздно ключ хранится так появляться заменены активность 10498 обычный погладить надеяться egfp базар CA ученый LM верно нужно 165 15779 сокращать Чжан Autissier клонирование степень HX ТАМРА четыре селективный стих бродить besse обнаруживаемый MC затронутый Кришнан физическое лицо проницаемый весь кодирование ранее ES 5450 Свиткина плазма 01605 этиловый спирт PD ожидал ведущий 1998 г. продвигать постентри предварительно 105 действие собранный многие Сваровская под парный проницаемость автор Watkin Sandrin AI089401 Массачусетт Ирвинг загрязняющий действовать Whitby инициированный освобожден пла способ не хватает покровное стекло 1NL4 фол сан 1974 г. понимание представитель идентифицированный слитный сиг программного обеспечения оптимизировать franks1 физиология микроскопия рекомбинантный гликопротеин 6996 комплекс гибкость сочинение e13229 в одиночестве маленький диссоциация комбинация трепло Bedford началось нить синтез сказать привлекать оригинал увеличивать фон фенотип мал предыдущий предложенный H87P Дои уридин РНК опубликовано возможно эффективно химия потом предотвратил нкабинде раскалывать эндогену гексамер онлайн длина актин содержащий 427 включение тримцип представил под 3институт контраст 279 6569 SB последовательность двигаться 5 мкм молекулярный наш отчетливый ранее определенный как правило ди прикладывать e1001220 K70R визуализированный го доступ ESI токсичность принято 293 медицинский скоро разрешать источник хлороформ конец распространение SP plpcx 15261 Типл здорово чем без увиливать воспроизводимый только отделение глутамин 7SL конверт 233 JG Грегори визуализировать жизнь гибсон2 продолжение стремительный очищенный Terreni 2000 г. концентрация Питт опосредованный сопротивление mbisa Джереми я порядок стрела следующий cle аполипопротеин данные титр оно 35828 поклонник телесницкий после Тран 1502 мизрахи стратег симм количественный CSD Warrilow подтверждение igg мен Мико 5mut разница путь 1997 г. интеграция специфический синхронизированный защищать Добрый 6988 820 кабальеро прядь вырос вычтенный на дестабилизирующий новый орг продвигать вниз по течению составлен соответственно нужный JA мин люцифераза Olivo последовательный вывод цитируется краситель ваш исследуя XTT названный соответственно отличаться профиль облегчено рассчитанный обычно внутриклеточный описывать Том ген последовательный алексафтор Слуи проба очищение боросиликатный вперед с ночевкой в сравнении шапка свободно пятикратный отношение ресуспендированный сделал обширный метод TRIM5 любой определять более мутация MS2 ДНК Берту отчет дестабилизировать самый использование имел останавливаться Информация иммунология низол GM082251 HEX шприц цитоплазматический ом Munier частица измерение формирование dntp помеченный фаза много ни один хлористый 337 Lucero ледяность левый эксперимент неполный видимый препарат, средство, медикамент Только CD4 594 фермент архел структурный 1000 pchelpδvif биомедицин бер Hatziioannou 430 рулли приближаться Левин в зависимый 6500 виноградник РС штат восстановлен с задержкой связанный нейтрализация НИАИД гора поведение ретровирус виру наоборот приехать файл сяо наименее процент исправлено PBS ПРИЗРАК гангстер получили бумага DMEM последний цитоплазма следующий биохим почти стоимость 3450074 Блэр содержать биомедицинский промытый двенадцать судьба ретротранспозиция флуоресцентный патхак ограничение мул анти CS количественно стр. 24 кинетический 2013 цитозоль бычий популярный применяемый некоторые функция 5678 неограниченный иммунодефицит тант LTR не против 549 Исааксон Сокольская двухслойный ан ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА антиретровирусный этикетка внутри сими аспект скорее всего Ди-джей нанятый вектор обнаружен лейпептин положительный слияние устойчивый Джонатан водичка подавитель вариация подмена быстро Питтсбург мотив ком обойти Европа побег 15784 микротрубочка творческий 13324 уменьшать диссоциировать упаковка интегрировать Педерсон Импортировать товар нераздельный изучение дырявый курс различные ниже моль специфический S5 внутренний студия рассеянный торможение e2413 Швейцария заразить произошел Другой SL Нашвилл преходящий срок Университет принцип ВИЧ C1 противоречивый цель Посмотреть формирование 2008 г. поступил нормализованный 4690 ПОС trim5 PFA манера Relie MJ деградация нарушить слился препятствие pnldvde Марин культура изгиб обесценение упакованный вдна локализованный 561 окрашивание хорошо прогрессировал предотвращение недавний химия Чарльтон Хибберт сотовый прес последовал Kwangho каталитический связаны плазмида указание расстраивать кодон нуклеокапсид Мир acgacggcaactacaagacc рано Сид форма параграф последний синтезированный дополнительный Onafuwa корецептор фигура неразрешенный существование полимераза исследовал SR 5677 pubmed июль http май акад lular разные функциональный лойтер цито оккуляция середина немедленный ключевой 2-й Роман с облегчением шах спе чт Hout 80oc непокрытие бурда Имари заразить номер 452 гликозаминогликан Литтман ошибка контрольная работа графическая панель нежно диссоциировать 100 300 как событие их мутант следовательно имея медленно король TNPO3 включены интерпретация обязательный zaa4 2012 г. также кровоточил отделка 11694 распределение Связанный WS над 441 во многом Пальто мелар токсичный побудить не допустить уловка неокрашенный Великобритания деконденсированный как DAPI подвергнутый особенно ха доказательство рукопись приходящий Амвросий1 500 на основании разборка единица измерения Accessi сделали страница поле HA завершение больше такой Ван незатронутый DR сценарий пример вставка исключение заболеть TD черри Келли оценен Tein камера микроскоп время поддерживать 5отдел количество S4 Стомати пенициллин индивидуально человек крачка атмосферные осадки дважды Дальберг матовый сова научный сложный трансфекция расшифровка клетка Айкен закрыто покрытый показал 270 представлять реакция 2007 г. Shotwell доминирующий Genovesio псевдотипирование рецептор 103 после этого зонд APOBEC3G инкуба производство VB зептометрикс помогать полезный 6343 изменить биофия cagctcgatgcggttcacca e1002009 Продолжать даровать полипептид использовать изолировать huber1 BK эффи несмотря на до тех пор переключился 3720 11682 Нью-Йорк температура голубой учреждение Стоя 1010 Скотт xu1 trim5a FAM заряжать акт изменение антиген нуклеозид впоследствии учреждать лед наблюдаемый Lyonnai иметь в виду вирион Диего начал Комплект Ким эндосомный edu подарок TRIM5α средний Катерина эффект ядро отклоненный 6623 прирост 848 Schwedler наводящий на размышления провиру абстрактный крупный начальный место инструкция гипотеза слить выше помощь Соединенные Штаты Америки Pazner 5122 играть мычание ограничение мутагенези снятие нацеливание лизать молекула последовательно Базен посоветовать 101 упаковываемый доступность гоф деятельность присутствие PF74 благодарить тип контекст молекула 569 природа поддержанный там S1 180 перре Гибсон частично вершина 1653 измерение происходить охотно пепстатин маркировка количество золла Перес ядра меж мало ELISA задний ход Йорк 5113 rhtrim5α гроненборн контакт Алекса барц должен рассчитанный IJ салиновый количественная оценка бар pol TJ интерес бедные dur инкубированный фосфат в результате правильно флюор Sayah Hulme предложенный злоба Сесилия дополнительный значительный арозио неф естественным образом синхронизировать спорический IBFQ переписка DE липид горка Бориси 4067 линия фигура 108 капсид ЮЗ рыболов полезный результат ЭМ биология геном 360 ДНК точка биохимический деталь интерфейс ультрацентрифугированный предлагая выполнила меньше rhtrim5a антитело подразделение 155 взаимодействие центр Albanese микробиология подавлять чувствительный 539 инкубация BD указал общение программа сценарий период Старый ману из-за сравнение LR задавались вопросом все AE Клау деградация 2006 г. грунтовка красный транспортируется 9980 Всего разработка орех служба поддержки TZM Отправить фактор прекращение контроль в том числе Аллан полный восстановление содержание JE любань3 под патрон честность по большей части Barr патология пятно написал чернить ухудшать проницаемый L111I Cremer1 ниже Создайте 817 в течение env размытый изменен замороженный Надя мутаген противовирусное средство несколько 10506 cy5 Макдональд вирус совсем недавно разрешающая способность непарный стоматити прога клонтех сто плод 3712 распределен 546 формальдегид родственник 1186 атрибуция открыто значительный важно выражая расширенный содроски характеристика Оуэн DG ZA содержал включение в качестве альтернативы интим разработан добыча сообщение с легкостью тонкий неизбирательный индуцированный испытанный Они связь ускоренный JS весьма ингибитор чао Мирро Юля режиссер 4586 серийный проницаемость цикл моноклональный NS Fluoview показывая количественное определение фильтр предложить релиз подавление производитель проанализированы псевдотип 5670 усиление ОЙ WI плос мрна основной ПФ Cereseto интерьер синий альтернатива до свидания выделить отклоняющийся от нормы Доступ КА белок мульти разбавление бездельничанье открытие Саймон Мартин Stremlau жизнь проверено RTC Рош выражает внутренний проникновение оболочка средний извлекать изолированные NC национальный добавление конфокальный амино- объяснять плохо начало 5439 давящий 4oc подавленный трансфекция очень сходным образом бактериофаг Strambio PA измеренный гли Jolla изучение JC 488 оказывать воздействие 342 биохимически дело RJ необработанный сработал подан Харрич Forshey поверхность интегрированный 824 120 флуоресценция кальций трехсторонний все вместе 9975 лар сформированный заразительность нормальный 008 200 JP шахабуддин получение фекция копротеин противостоящий призма Карловы Вары аллен невирусный урожай DM коррелирующий понял конкурирующий активный Синдби очевидный Горелик исследовать Лю удлинение лизат В данный момент независимо Км тревожный открыт задуманный обнаружение добавлен раскрытый при условии модуляция S15 продолжить удаленный действие 2отдел физически перевернутый ядерный химический масса лечение послушный тщательный rahm3 tacgtccaggagcgcaccat МВт Emerman сопровождающий определять крио скопу котрансфицированный реагент апротинин Светлячок исходный Ent совпадение Sefton центральный соответствовать Гуаданьини тион графия Джексон дукция вишня признание отмеченный транскрипция перевязка Олимп привести сопоставимый ши тарелка особенность мог Кэмпбелл эндоцитоз прево Tect стабильный Meiler механизм стрикция pcdna вирусология обсуждение Сендай 2005 г. рибонуклеаза второй граница Зандреа неожиданный более того сообщил пробирка 422 зрелый работай статистика перераспределение индикатор CR буйвол сдерживать строить SD кван будь то копировать покрытие Справка электрон 2011 г. cite Braaten проникать активность собран два выставление считать каждый где роль техника пообещал вложение Это T107N смешанный NR удостоверение личности склад 268 полный кастилия3 ДМСО aiken5 эффективный Вольский хан имеется в наличии Strebel одобренный блокировать Однако обнаружение двойной Rouzina детерминант азид ценный один Резу включены допустимый сайт ВКонтакте Роберт протеасома Conway коррелированный Хосе EMBO qpcr возможно перечисленные буду зараженный сложный средний Никола реагировать образец 992 очень инфекция GM068406 деготь проблема порнилло Уоррен произвел 160 непредвиденный ре x107 компонент E45A 13328 стал биомедицина лимфоцит цикло Вандербильт invitrogen предполагаемый Quire 107 верно EO соотношение 221 потом 734 мутный удаление привет непосредственный BM инкорпорировать последовательно партия 1646 534 Амвросий собраны штат выросла размерный независимый скрученный Кроме того гетеролог 724 отражать 5652 отклонить ограниченный аналогичный яркий 1995 г. трудность ОМК деградированный калиф описанный указывать помедленнее бесплатно фак процесс периферия лицензия реквизит время RT разрешать час 293T больше Вустер о’лири 2230 JH Озтоп здесь хрупкий место гарантировать диванная подушка анализ 250 связывать GFP аликвота статья ссылка на сайт между удобный пространство ограничительный утвержденный сыворотка вглядеться конический поры гранулированный DP MA ораторствовать D443N под влиянием буфер кляп извлекать 4программа les мысль 2010 г. ретровиру предположительно публикация 140 www лань коррелятивный 985 немаркированный cao обильный нуга выставлен Вход хлопать 7470 чам алкин отраженный покрытый глицерин три тело мойка rnase с использованием не замужем наблюдать сигнал преимущество поскольку критический ing наивно врна пикфорд Когда-либо мута нетронутый ретровирусный появился противник нуклеиновый Бауманн монтаж Google сравнивать Национальные институты здравоохранения США ЛСИИ потерянный Jao инициация ограничено Экерт не могущий рукопись иммунохимический в пределах полученный вел уступать визуализация прока июн в некотором роде объявлять 1813 г. 2004 г. Мирамбо внесение изменений обработка Выбрать отслеживать 1-й шестиугольный потому что условие решетка Yeager Нью-Джерси уровень СПИД стойкий S3 дополнен Шарно завершено Engelman спросил происходящий 1978 г. застрявший бионаука частота предыдущий нормализация люк снижаться немного равный 5657 кда дольше удивительно 3037 7465 оптимальный Депутат использовал ласково ни когда ответственный K203A задний план микроб дружелюбно 5667 лаборатория 6564 1573 нарушение остеосаркома повторно впр christensen Watkins2 раскрывать Quent заметно служил хозяин истощение Кисслинг вирол тек дальше изменять незараженный ЭДТА называется институт изначально ассоциировать сверхстабильный нестабильность шаг привит 286 тритон фенол неизвестный манипулирование двухфазный обозначать точка IU поток 000 обезьяна мембрана алам терапевтический возбудитель биол небольшой 1581 визуализация найденный цвет Musier ассоциация Forsyth 853 тор вместо Sheehan GA TM щелкнуть незащищенный Лач фактурщик 4061 низкий полимер через пока Павел ген брать загрузка RU5 развитый минута минимизировать Langelier транскриптаза передача FBS школа разъединять удаление колокализация параформальдегид читать Любань Чандрасекаран однажды отслеживание график 150 настойчивый уменьшился накопление настоящее время минимальный индуктор вмешательство ферментированный возмущение Чжоу TN выставлять или трудность общий здоровье назначенный обнаруживать на протяжении обзор SEM немелованный сравнение Гарру ограничивать SR2 транспортировка гибкий 159 эфавиренц KH trim5alpha дефект список Ян модифицированный оборот казаться дестабилизация CCR5 сцена основной жизнеспособность состоять продуктивно размер 1742 г. перечисленный боковая сторона действующий пунктировать охотник полностью ПЦР кислота Zang короткая S2 В отличие от сборка трансфекция смотрящий кодировать большинство 190 нести трубка участие Stenzel жесткость исправление требовать R132T предшественник мышь вклад ретровирология 6332 микроскопический тамера Андерсон Резерфорд стрептомицин интересно наложенный вс съеденный воспроизведение не можешь привязка нет коричневый фильтрация vif оставаться разделение стенограмма перрон липофектамин CAS остались жить АК Ли стандарт перед репликация Кристофер Кутлуай пероксиванадат везикулярный CY Натл разлагаться комната статистически высокая пила Souquere первый лизированный 37oc суб структура полностью 2003

Киназа-4, связанная с рецептором интерлейкина-1 (IRAK4), способствует воспалительному остеолизу путем активации остеокластов и ингибирования образования гигантских клеток инородного тела

Образование гигантских клеток инородного тела (FBGC) происходит после имплантации медицинских устройств, таких как искусственные суставы и вовлечен в отказ имплантата, связанный с воспалением или микробной инфекцией.Две основные субпопуляции макрофагов, M1 и M2, играют разные роли в воспалении и заживлении ран, соответственно. Следовательно, поляризация M1 / ​​M2 имеет решающее значение для развития различных заболеваний, связанных с воспалением. Здесь мы показываем, что FBGCs не резорбируют кость, а скорее экспрессируют M2-подобные макрофаги молекулы для заживления ран и прекращения воспаления in vitro . Мы также обнаружили, что образование FBGC значительно ингибировалось воспалительными цитокинами или миметиками инфекции in vitro .Дефицит киназы-4, ассоциированной с рецептором интерлейкина-1 (IRAK4), не влиял на формирование остеокластов in vitro , а у мышей с дефицитом IRAK4 минеральная плотность костей была нормальной in vivo . Однако мыши с дефицитом IRAK4 были защищены от чрезмерного остеокластогенеза, индуцированного IL-1β in vitro или LPS, миметиком инфекции грамотрицательных бактерий, in vivo . Кроме того, дефицит IRAK4 восстанавливает образование FBGC и экспрессию маркеров макрофагов M2, ингибируемых воспалительными цитокинами in vitro или LPS in vivo .Наши результаты демонстрируют, что остеокласты и FBGC реципрокно регулируются, и идентифицируют IRAK4 как потенциальную терапевтическую мишень для ингибирования стимулированного остеокластогенеза и восстановления ингибированного образования FBGC в воспалительных и инфекционных условиях без изменения физиологической резорбции кости. В настоящее время неясно, как остеокласты и гигантские инородные тела клетки (FBGC) регулируются по-разному.

Результаты

Воспалительные цитокины и миметики инфекции активировали остеокластогенез и ингибировали образование FBGC, на что указывает поляризация макрофагов M1 / ​​M2 IRAK4-зависимым образом.

Заключение

Остеокласты и FBGCs взаимно регулируются IRAK4.

Значение

Это исследование обеспечивает основу для понимания регуляции реакций на инородные тела с помощью IRAK4.

Кость

Клеточная биология

Дифференциация

Экспрессия гена

Остеокласт

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

© 2015 ASBMB. В настоящее время опубликовано Elsevier Inc; Первоначально опубликовано Американским обществом биохимии и молекулярной биологии.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

% PDF-1.4 % 338 0 объект > эндобдж xref 338 84 0000000016 00000 н. 0000002031 00000 н. 0000002153 00000 н. 0000002550 00000 н. 0000003255 00000 н. 0000003278 00000 н. 0000005150 00000 н. 0000005419 00000 н. 0000006523 00000 н. 0000006546 00000 н. 0000008335 00000 н. 0000008358 00000 н. 0000010141 00000 п. 0000010164 00000 п. 0000012004 00000 п. 0000012027 00000 н. 0000014005 00000 п. 0000014028 00000 п. 0000015767 00000 п. 0000015790 00000 п. 0000017422 00000 п. 0000017706 00000 п. 0000017975 00000 п. 0000017998 00000 н. 0000019726 00000 п. 0000019747 00000 п. 0000019768 00000 п. 0000019791 00000 п. 0000024401 00000 п. 0000024424 00000 п. 0000028689 00000 п. 0000028712 00000 п. 0000034821 00000 п. 0000034844 00000 п. 0000039797 00000 п. 0000039820 00000 н. 0000044351 00000 п. 0000044374 00000 п. 0000049860 00000 п. 0000049883 00000 п. 0000054141 00000 п. 0000054164 00000 п. 0000055894 00000 п. 0000055916 00000 п. 0000056411 00000 п. 0000056433 00000 п. 0000057310 00000 п. 0000057333 00000 п. 0000061842 00000 п. 0000061865 00000 п. 0000067618 00000 п. 0000067641 00000 п. 0000068916 00000 п. 0000068939 00000 п. 0000073938 00000 п. 0000073961 00000 п. 0000075874 00000 п. 0000075897 00000 п. 0000082311 00000 п. 0000082334 00000 п. 0000087244 00000 п. 0000087267 00000 п. 00000

00000 п. 00000 _{00000 п. 0000097667 00000 п. 0000097688 00000 н. 0000097979 00000 п. 0000098002 00000 п. 0000103100 00000 н. 0000103123 00000 п. 0000108752 00000 н. 0000108775 00000 п. 0000114093 00000 н. 0000114116 00000 п. 0000116755 00000 н. 0000116778 00000 н. 0000121859 00000 н. 0000121882 00000 н. 0000127654 00000 н. 0000127677 00000 н. 0000133151 00000 н. 0000133174 00000 н. 0000002217 00000 н. 0000002528 00000 н. трейлер ] >> startxref 0 %% EOF 339 0 объект > эндобдж 340 0 объект > эндобдж 420 0 объект > ручей Hb«e`X, ̀}

преимущества и технические ограничения для обнаружения инвазивных раков «Procambarus clarkii» в пресноводных водоемах на JSTOR

1.Интродукция неместных видов представляет собой серьезную угрозу биоразнообразию. Хотя программы искоренения устойчивых захватчиков являются дорогостоящими и опасными для нецелевых видов, раннее обнаружение неместных видов при низкой плотности имеет решающее значение для предотвращения биологических инвазий в экосистемах-реципиентах. Недавние исследования показывают, что экологическая ДНК (эДНК) является мощным инструментом для обнаружения целевых видов в водных экосистемах, но эти исследования в основном сосредоточены на рыбах и земноводных. 2. Мы исследуем надежность использования eDNA для обнаружения инвазивных видов пресноводных ракообразных, красных болотных раков Procambarus clarkii.Были сконструированы видоспецифичные праймеры и зонды; их специфичность была проверена с помощью моделирования ПЦР in silico и на тканях других видов раков. Пределы обнаружения и количественного определения были определены для целевой последовательности ДНК посредством количественной ПЦР-амплификации на серии разведений известного количества ДНК P. clarkii. 3. Метод был применен к пробам воды, собранным в 158 прудах во французском природном парке, и результаты сравнивались с традиционным методом с использованием воронок-ловушек с кормовой наживкой.Экологическая ДНК имела лучшую эффективность обнаружения, но в основном приводила к разным результатам по сравнению с методом отлова. В то время как особенности среды обитания частично объясняют неспособность обнаружения раков отловом в ловушку, обнаружение с помощью eDNA было проблематичным при низкой численности раков. Когда был обнаружен P. clarkii, расчетные концентрации ДНК раков в пробах воды всегда были ниже предела количественной оценки целевой последовательности ДНК. 4. Синтез и приложения. Для мониторинга инвазии P.clarkii в небольших водоемах, таких как пруды. Однако перед широкомасштабным развертыванием ловушек необходимо тщательно оценить риск гибели нецелевых видов, особенно земноводных. В отличие от рыб и земноводных, небольшое количество внеклеточной ДНК в воде считается основным ограничением для обнаружения раков с помощью молекулярных подходов. Текущие достижения в технологии ПЦР, вместе с оптимизацией метода отбора проб воды, обещают будущие разработки в области обнаружения электронной ДНК для водных беспозвоночных.

Journal of Applied Ecology публикует новые статьи, относящиеся к экологическим концепции, теории, модели и методы управления биологическими ресурсами в самом широком смысле. Редакторы поощряют публикации, в которых используются прикладные экологические проблемы, чтобы проверить и развить основную экологическую теорию, хотя должен быть четкий потенциал для улучшения управления. Журнал включает в себя все основные темы прикладной экологии: природоохранная биология, глобальные изменения, окружающая среда. загрязнение, управление дикой природой и средой обитания, землепользование и управление, водные ресурсы, экология восстановления и борьба с вредителями, сорняками и болезнями.Статьи, которые связаны со смежными полями, приветствуются при условии, что их актуальность для прикладной экологии очевидна. Более подробная информация доступна на сайте www.journalofappliedecology.org. JSTOR предоставляет цифровой архив печатной версии журнала. прикладной экологии. Электронная версия журнала The Journal of Прикладная экология доступна по адресу http://www3.interscience.wiley.com/journal/117972213/home. Авторизованные пользователи могут иметь доступ к полному тексту статей на этом сайте.

Британское экологическое общество — это гостеприимный и инклюзивный дом для всех, кто интересуется экологией. Общество было основано в 1913 году и насчитывает более 6000 членов по всему миру, объединяя людей в региональном, национальном и глобальном масштабах для продвижения экологической науки. Многие виды деятельности BES включают публикацию ряда научной литературы, в том числе семи всемирно известных журналов, организацию и спонсорство широкого спектра встреч, финансирование многочисленных схем грантов, образовательную работу и политическую работу.

хлоридных каналов регулируют объем HIT-клеток, но не могут полностью учесть секрецию инсулина, вызванную набуханием -активирован, но роль этих каналов в клетках неясна. Блокаторы каналов Cl

Несмотря на то, что многое известно о соответствующих ролях катионов и мембранных катионных каналов в функции островков (1), для сравнения имеется мало подробной информации о физиологической роли анионов или механизмов манипулирования анионами в островках.Это верно, даже несмотря на то, что в течение некоторого времени было известно, что островки имеют потоки анионов, чувствительных к глюкозе (2), и что замещение анионов значительно изменяет секрецию инсулина (2,3). Кроме того, было показано, что блокаторы анионных каналов сильно модулируют индуцированную глюкозой электрическую активность островков (4). Большинство этих более ранних исследований влияния анионов на физиологию островков предполагало, что переносчики или насосы анионов, а не каналы анионов, были преобладающими механизмами транспорта анионов островковых клеток.

Открытие нового анион-селективного канала в β-клетках островков поджелудочной железы Kinard и Satin (5) и Best et al. (6) предполагает, что некоторые из ранее наблюдаемых эффектов анионов на функцию островков могут быть опосредованы анионопроницаемым ионным каналом. Этот анионопроницаемый канал β-клеток островка поджелудочной железы Cl ^— (I _{Cl, островок} ) представляет собой внешне выпрямляющий канал Cl ^—, который активируется набуханием клеток (вызванным применением гипотонического раствора) или повышением во внутриклеточном цАМФ (5).I _{Cl, островок} ингибируется известным блокатором каналов Cl ^— 4,4′-диизотиоцианатостильбен-2,2′-дисульфоновой кислотой (DIDS) или глибуридом 100 мкмоль / л (5). Канал также может находиться под метаболическим контролем либо в силу его чувствительности к внутриклеточному АТФ (5,6), либо из-за набухания β-клеток, связанного с повышенным метаболизмом глюкозы (7).

Из-за относительно деполяризованного реверсивного потенциала I _{Cl, островка} (-30 мВ) (5), его активация в физиологических условиях, как ожидается, деполяризует β-клетки за счет производства чистого входящего тока, опосредованного чистым оттоком анионы (5,6).Таким образом, I _{Cl, активация островка} после повышенного метаболизма глюкозы приведет к деполяризации β-клеток, активации активируемых напряжением каналов Ca ²⁺ , увеличению притока Ca ²⁺ и усилению Ca ²⁺ — зависимая секреция инсулина. Таким образом, активация I _{Cl, островка} может частично объяснять деполяризующее действие таких разнообразных стимуляторов островков, как цАМФ (81213), гипотонические растворы (14) или сама глюкоза (15). Эти эффекты могут сочетаться с более известными эффектами метаболизма глюкозы для деполяризации β-клеток и стимулирования высвобождения инсулина путем закрытия мембранных каналов K _ATP (1,16,17).Поскольку известно, что гипотонические растворы стимулируют переходную фазу секреции инсулина в островках крысы (18), было высказано предположение, что набухание клеток высвобождает инсулин путем активации активируемых набуханием каналов Cl ^—, таким образом деполяризуя островки (6,14). . Аналогичный механизм был предложен Moser et al. (19) для объяснения индуцированной гипотонией секреции катехоламинов хромаффинными клетками надпочечников крысы.

В настоящем исследовании мы преследовали несколько целей. Во-первых, мы исследовали фармакологическую чувствительность I _{Cl, островка} к блокаторам каналов DIDS и нифлумовой кислоте, чтобы идентифицировать полезный блокатор каналов Cl ^—, который можно использовать для исследования функции каналов Cl ^— в физиологических исследованиях.Во-вторых, мы исследовали влияние блокирования каналов Cl ^— на регуляцию объема клеток HIT, чтобы проверить гипотезу о том, что островковые каналы Cl ^— играют роль в этом процессе, и сопоставить их возможное участие с участием фуросемид-чувствительного Na / Котранспортер K / 2Cl (20) или катионные каналы. В-третьих, мы исследовали гипотезу, что активация I _{Cl, островка} опосредует индуцированную набуханием секрецию инсулина; мы сделали это, проверив, ингибируют ли два разных блокатора каналов Cl ^— гипотонически индуцированное высвобождение инсулина из перифузированных клеток HIT.Затем был использован стандартный протокол для оценки гипотезы о том, что отек может увеличивать секрецию, напрямую влияя на дистальные этапы экзоцитоза инсулиновых гранул. Наконец, в качестве первого шага к окончательному установлению молекулярной идентичности I _{Cl, островка} , была использована обратная транскриптаза (RT) –полимеразная цепная реакция (ПЦР), чтобы определить, присутствует ли мРНК для CLC-3 в клетках HIT, потому что это Изоформа канала Cl ^— является сильным кандидатом на внешнее выпрямление активируемого набуханием канала Cl ^— других тканей (212223242526).

Дизайн и методы исследования

Культура клеток.

Инсулин-секретирующие клетки HIT-T15 культивировали в среде Ham’s F-12 и еженедельно пассировали с использованием трипсин-ЭДТА, как описано ранее (27,28). HIT-клетки из пассажей 50–70 высевали с плотностью 5 × 10 ⁴ клеток / мл на покровные стекла, помещенные в чашки Петри диаметром 35 мм. Чашки с культурами хранили при 37 ° C в инкубаторе воздух / CO ₂ , и клетки кормили каждые 2–3 дня.

Электрофизиология и решения.

клеток HIT помещали в записывающую камеру, прикрепленную к столику инвертированного микроскопа (IMT-2 или IX50; Olympus, Tokyo). Для измерения тока Cl ^— использовали методику целых клеток (29), как описано ранее (5). Клетки фиксировали по напряжению до -65 мВ. Регистрирующую камеру непрерывно переливали внешним раствором, который содержал (в ммоль / л): 115 NaCl, 3 CaCl ₂ , 5 CsCl, 0,2 CdCl ₂ , 10 тетраэтиламмоний-Cl (TEA), 1 MgCl _{. 2} , 5 × 10 ^{— 4} тетродотоксин (TTX), 10 HEPES и 11.1 глюкоза, pH 7,2 (274 ± 5 ​​мОсм). Электроды заполняли раствором, содержащим (в ммоль / л): 114 Cs-аспартат, 10 CsCl, 2 Mg ₂ ATP, 20 HEPES, 1 EGTA и 10 4-аминопиридин (4-AP), pH 7,2 (269 ± 5 мОсм). CdCl ₂ был добавлен к внешнему раствору, чтобы заблокировать ток Ca ²⁺ . Токи Na ⁺ были заблокированы TTX, а токи K ⁺ были заблокированы внутренним ATP, 4-AP, заменой всех внутренних K ⁺ на Cs ⁺ и внешнего TEA ⁺ .Эти решения изолировали ток Cl ^— от других известных токов β-клеток (5). Гипотонический раствор (222 ± 3 мОсм) был идентичен контрольному раствору, за исключением того, что [NaCl] был уменьшен на 25%, с 115 до 86,3 ммоль / л, что снизило осмолярность на 20% (0,8T). Все химические вещества были получены от Sigma (Сент-Луис, Миссури). Cl ^{— блокаторы каналов} растворяли в ДМСО и делали свежими ежедневно; после разбавления конечная концентрация носителя ДМСО в растворах составляла 0,1%.

Электроды были изготовлены из боросиликатных трубок с использованием горизонтального съемника Sutter (P-97; Sutter Instruments, Novato, CA).Стандартный герметичный патч-зажим для целых клеток использовали для регистрации тока Cl ^— (29) с помощью усилителя патч-зажима Axopatch-1D (Axon Instruments, Foster City, CA). Все электрофизиологические и объемные эксперименты проводились при комнатной температуре (20–22 ° C). Сопротивление пипетки и уплотнения составляло от 5 до 20 МОм и от 2 до 20 ГОм соответственно. Для компенсации сопротивления серии пипеток использовались стандартные методы. Потенциал жидкого перехода между внутренним раствором Cs-аспартата с низким содержанием Cl ^— и внешним раствором с высоким содержанием Cl ^— составлял +8 мВ.Потенциалы, показанные на рисунках, не корректировались на это смещение.

Оценка объема HIT-клеток.

Объем клеток периодически контролировали путем измерения диаметра HIT-клеток сеткой окуляра при 600-кратном увеличении с использованием фазовой микроскопии (средний диаметр HIT-клеток составлял 22,9 ± 0,8 мкм, n = 10) (5). Измерения диаметра клеток HIT использовали для оценки нормализованных объемов клеток, используя следующее:

Анализ данных.

Сбор и анализ данных проводились с использованием компьютера Macintosh Quadra 800 или G3 (Apple Computer, Купертино, Калифорния), 16-битного аппаратного интерфейса 200 кГц (Instrutech, Элмонт, Нью-Йорк), IgorPro 3.0 (Wavemetrics, Lake Oswego, OR) и программное обеспечение Pulse Control (30). Мембранные токи, активируемые генерируемым компьютером током-напряжением (I-V) или контрольными тестовыми импульсами, фильтровались с частотой 2 кГц и оцифровывались с частотой 5 кГц. Токи, вызванные импульсами, анализировали, как описано Сатином и Куком (28), за исключением того, что данные не вычитались из исходной линии или утечки. Для исследования были выбраны только отдельные изолированные клетки, чтобы избежать возможных электрических осложнений межклеточного взаимодействия (28). Тест Стьюдента t или дисперсионный анализ использовался для определения значительных различий в данных.

Секреция инсулина.

клеток HIT высевали с плотностью 2,5 × 10 ⁵ клеток / мл в две 75-см колбы ² и собирали через 5 дней. Колбы промывали 5 мл фосфатно-солевого буфера, содержащего 100 мг / дл глюкозы, и помещали в инкубатор при 37 ° C на 60 мин. Затем клетки удаляли механическим пипетированием, центрифугировали и ресуспендировали в 4,5 мл бикарбонатного буфера Кребса-Рингера, содержащего (в г / л): 5,76 NaCl, 0,37 KCl, 0,17 KH ₂ PO ₄ ,0.30 MgSO ₄ -7 H ₂ O, 2,18 NaHCO ₃ , 0,39 CaCl ₂ , pH 7,4 и 0,1% бычий сывороточный альбумин с 0 глюкозы. Колонки, содержащие шарики полиакриламидного геля (Bio Gel P-2; Bio Rad, Richmond, CA), использовали в качестве поддерживающей матрицы для клеток HIT, и колонки перифузировали при 1 мл / мин в течение 2 ч для определения характера высвобождения инсулина. Клетки наслаивали на слой геля непосредственно перед началом перифузии. В экспериментах по выделению дистального секрета использовали 50 ммоль / л [KCl] и 100 мкмоль / л диазоксида для постоянного открытия каналов K _ATP и деполяризации клеток (31).Гипотонические растворы, используемые для запуска высвобождения инсулина, не влияли на жизнеспособность HIT-клеток.

Для радиоиммуноанализа инсулина использовали стандартные процедуры (32). Высвобождение инсулина выражали как процентное фракционное высвобождение для каждого экспериментального условия, рассчитанное как [(количество инсулина, собранного из инкубационного буфера) (инсулин, собранный из инкубационного буфера + содержание инсулина в клеточном слое)] × 100%. Детали перифузии HIT-клеток, включая чувствительность этих клеток к глюкозе, описаны Fujimoto и Teague (33).

Молекулярная биология нет.

Олигонуклеотидные праймеры были сконструированы так, чтобы быть гомологичными опубликованным последовательностям хлоридных каналов CLC-3 морских свинок (26) и крыс (25). Используемый 5′-праймер соответствовал 4–24 п.н. последовательности морской свинки (ACA ATG ACA AAT GGA GGC AGC) (26). 3′-праймер соответствовал 576–596 п.н. на противоположной цепи CLC-3 морской свинки (CCT CTG ATG ATG AAT CCA CTC) (26). Их использовали в ПЦР для создания фрагмента длиной 593 п.н. в мРНК клетки HIT. МРНК клеток HIT получали с использованием стандартных методик (Trizol Reagent LTI, Gaithersburg, MD).Суммарную мРНК клеток HIT подвергали обратной транскрипции и амплифицировали для получения кДНК CLC-3 с использованием набора для РНК-ПЦР (PE Express, Foster City, CA). Общую мРНК (1 мкг) добавляли в пробирку, содержащую смесь для обратной транскрипции (1 ммоль / л MnCl ₂ , 50 ммоль / л KCl, 10 ммоль / л Tris-HCl, pH 8,3, 0,2 ммоль / л dGTP, 0,2 ммоль. / л дАТФ, 0,2 ммоль / л дТТФ, 0,2 ммоль / л дЦТФ, 1 ед / мкл ингибитора плацентарной РНКазы, 2,5 ед / мкл RT вируса мышиного лейкоза Молони и 2,5 мкмоль / л 3′-праймера) в конечном объеме 20 мкл . Обратную транскрипцию проводили при 60 ° C в течение 5 мин.Всю смесь для обратной транскрипции разбавляли до 100 мкл MnCl ₂ , KCl и Tris-HCl, pH 8,3, добавленными до конечных концентраций 2, 50 и 10 ммоль / л соответственно. Затем добавляли 5′-праймер (0,15 мкмоль / л, конечный). Используемые циклы термоциклера составляли 2 мин при 95 ° C для 1 цикла, 1 мин при 95 ° C и 3 мин при 60 ° C для 30 циклов, затем 7 мин при 60 ° C для 1 цикла. В качестве отрицательного контроля мы оценили, возможно ли, что геномная ДНК загрязняет РНК. Таким образом, обратную транскрипцию выполняли с использованием 5′-праймера для стадии обратной транскрипции (который транскрибировал бы ДНК, но не соответствующую РНК) с последующей ПЦР с 3′-праймером.В качестве положительного контроля мРНК интерлейкина-1α амплифицировали с использованием праймеров, поставляемых в наборе, для получения продукта кДНК длиной 308 п.о. Затем продукты ПЦР очищали в геле и клонировали в вектор pGEM T-Easy Cloning (Promega, Madison, WI). Полученные образцы секвенировали вручную с помощью дидезокси-метода (US Biochemical, Cleveland, OH) и подтверждали секвенированием обеих цепей (Retrogen, San Diego, CA).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Нифлуминовая кислота блокирует I

Ранее мы показали, что блокатор каналов Cl ^— DIDS блокирует I _{Cl, островок} в HIT-клетках (5), и, таким образом, мы предположили, что нифлуминовая кислота, другой блокатор каналов Cl ^— (21,34), также будет эффективным.Было высказано предположение, что нифлумовая кислота является лучшим зондом, чем DIDS, для оценки физиологической роли регулируемых объемом каналов Cl ^— в тканях, таких как сердце, поскольку ее блокировка менее зависит от напряжения (35).

При заблокированных каналах Na ⁺ , K ⁺ и Ca ²⁺ в HIT-клетках с фиксированным напряжением в изотонических условиях наблюдались только небольшие базовые токи. Применение внешнего раствора, который был 20% гипотоническим по отношению к изотоническому контрольному физиологическому раствору, привело к прогрессивному увеличению объема клеток и сопутствующему увеличению внутренних токов (при -65 мВ) и выходных токов (при +10 мВ) из-за I _{Cl, активация островка} (рис.1 А ) (5). Применение 100 мкмоль / л нифлумовой кислоты к гипотоническому раствору быстро уменьшило I _{Cl, островок} при обоих испытательных напряжениях (рис. 1 A ). На рис. 1 B показаны характерные кривые тока, вызванные импульсами напряжения длительностью 40 мс, которые измеряли мембранные потенциалы в диапазоне от –120 до +50 мВ с шагом + 10 мВ. Только небольшой почти линейный фоновый ток был виден в изотонических условиях (рис. 1 B ) (5). Однако после воздействия гипотонического раствора входящие и исходящие токи, опосредованные I _{Cl, островок} явно активировался (рис.1 В ). Гипотонически активированный ток был относительно независимым от времени в исследованном диапазоне напряжений и не показал никаких доказательств инактивации во время этих коротких импульсов напряжения (5). Как показано на рисунке, как импульсный, так и удерживающий токи подавлялись нифлумовой кислотой 100 мкмоль / л.

На рис. 1 C показаны зависимости тока от напряжения (I-V), полученные в изотоническом растворе, гипотоническом растворе и гипотоническом растворе, которые также содержат нифлуминовую кислоту. В базовых изотонических условиях наблюдался небольшой входящий ток при -120 мВ (средний ток составлял -26.0 ± 7,9 пА, n = 10) и выходной ток при +50 мВ (+78,4 ± 16,0 пА, n = 10). После применения гипотонического раствора пиковый ток увеличился до -90,9 ± 73,1 пА ( n = 5) при -120 мВ и до +592,0 ± 104,1 пА ( n = 5) при +50 мВ. Средний реверсивный потенциал гипотонически индуцированного тока составил -32 ± 2,4 мВ после поправки на эффект потенциала жидкостного перехода. Добавление 100 мкмоль / л нифлумика снизило пиковый внутренний ток до -34,2 ± 4.8 пА ( n = 5) при –120 мВ и выходной ток до +69,0 ± 20,1 пА ( n = 5) при +50 мВ, что было близко к исходному базовому уровню.

Блокада I _{Cl, островка} нифлумовой кислотой (21,34) была дозозависимой (рис. 2). I _{Cl, островок} в этом случае измеряли при +10 мВ в гипотоническом растворе, а затем к гипотоническому раствору добавляли различные дозы нифлумовой кислоты. Значение IC ₅₀ , полученное при аппроксимации этих данных, составляло 7 мкмоль / л для нифлумовой кислоты.В дозе 100 мкмоль / л нифлуминовая кислота блокировала 94% I _{Cl, островок} . Зависимость доза-ответ не была получена для DIDS, потому что у нас были трудности с получением измеримой блокады при дозах <100 мкмоль / л. Однако для сравнения мы ранее показали, что 100 мкмоль / л DIDS блокирует ~ 64% I _{Cl, островка} при +10 мВ (5).

Мембранный потенциал значительно повлиял на I _{Cl, блокаду островков} из-за DIDS или нифлумовой кислоты. Так, при +50 мВ 100 мкмоль / л ДИДС блокировал 73 ± 3.3% пикового тока Cl и 100 мкмоль / л нифлумовая кислота блокировали 79,6 ± 6,3%. Эта разница не была значимой ( P > 0,05). Однако при -120 мВ DIDS блокировал только 19,88 ± 6,86%, тогда как нифлумовая кислота блокировала 54 ± 7,56% пикового тока Cl ( P <0,05). Оба препарата блокировали значительно больше тока при +50 мВ, чем при -120 мВ. Таким образом, блок DIDS I _{Cl, островка} оказался более чувствительным к мембранному напряжению, чем блокада, связанная с нифлумовой кислотой.Поскольку диапазон физиологического напряжения β-клеток составляет приблизительно от -70 до -10 мВ, нифлуминовая кислота, по-видимому, является более подходящим зондом для определения физиологической роли I _{Cl, островка} .

I

Объемы отдельных HIT-клеток были оценены путем измерения диаметра HIT-клеток и последующего вычисления сферических объемов клеток (см. План и методы исследования) (5). Когда отдельные клетки HIT оставались в изотоническом растворе, их нормализованные объемы оставались относительно постоянными (рис.3 А ). Однако после введения гипотонического (0,8Т) раствора объем клеток прогрессивно увеличивался в течение нескольких минут (на 14,2%, для данных, показанных на фиг. 3 A ), за чем следовало спонтанное регуляторное уменьшение объема (RVD). RVD наблюдались ранее после применения гипотонических растворов к β-клеткам крыс (36,37), клеткам RINm5F (38) и β-клеткам мыши (39). Когда гипотонический раствор также содержал 100 мкмоль / л нифлумовой кислоты, RVD в значительной степени блокировался, и объем клеток значительно увеличивался еще на 29.На 5% больше, чем при применении только гипотонического раствора ( P <0,05) (рис. 3 A ). Гипотонически индуцированное набухание можно обратить, промывая клетки изотоническим контрольным раствором.

В отдельной серии экспериментов (рис. 3 B ) добавление гипотонического раствора снова вызывало увеличение объема клеток (29,8% в данном случае) с последующим RVD, аналогично данным, показанным на рис. Рис.3 A . Добавление 100 мкмоль / л DIDS к гипотоническому раствору снова полностью блокировало RVD и усиливало набухание клеток, хотя усиление из-за DIDS было меньше, чем наблюдаемое с нифлумовой кислотой, и не было статистически значимым.Таким образом, добавление нифлумовой кислоты или DIDS к гипотоническому раствору блокировало RVD и, в случае нифлумовой кислоты, значительно усиливало набухание клеток. I _{Cl, блок островка} , как ожидается, увеличит поступление воды в клетку во время осмотического шока, если открытие канала Cl ^— обычно поддерживает чистый отток анионов для восстановления объема клетки (см. Обсуждение). Как показано на фиг.3 C , добавление нифлумовой кислоты в изотонических условиях приводило к временному набуханию клеток (~ 11.2%), предполагая, что каналы Cl ^— помогают регулировать объем клеток HIT даже в отсутствие осмотической нагрузки (например, в изотонических условиях).

Чтобы исключить зависящие от времени изменения способности клеток HIT реагировать на вторую осмотическую нагрузку, мы подвергли клетки двум идентичным осмотическим испытаниям с использованием гипотонических растворов, не содержащих лекарств. Как показано на фиг.3 D , HIT-клетки набухали в такой же степени после второго воздействия того же гипотонического раствора ( P > 0.05). Таким образом, изменения в набухании клеток, которые мы наблюдали в других экспериментах, в которых лекарства присутствовали во время второго воздействия, не могут быть объяснены зависимой от времени потерей осмотической чувствительности, такой как та, которая может происходить из-за необратимой потери внутриклеточных растворенных веществ.

Роль катионных каналов и котранспортера Na / K / 2Cl в регуляции объема HIT-клеток.

В предыдущих исследованиях регуляции клеточного объема в других системах активация катионных каналов после набухания клетки часто сопровождалась активацией анионных каналов (40).В наших исследованиях добавление глибурида (в концентрации 100 мкмоль / л) к гипотоническому раствору практически не влияло на набухание клеток по сравнению с одним гипотоническим раствором (15,8 против 20,4%) и не подавляло RVD (рис. 3 E ). В этой дозе глибурид полностью блокирует ток канала K _ATP (изм. 1,17) и подавляет ток Cl на 44% (5). Это предполагает, что K _ATP не участвует в регуляции объема HIT-клеток и что частичная блокада островковых Cl-каналов может быть недостаточной для воздействия на регуляцию объема клеток.Точно так же добавление гадолиния (рис. 3 F ), который блокирует активированные растяжением катионные каналы (41), или ТЭА (рис. 3 G ), который блокирует широкий спектр каналов K ⁺ в островке клетки (42), не смогли ни потенцировать набухание клеток, ни ингибировать клеточный RVD.

Затем мы исследовали вклад котранспортера Na / K / 2Cl в регуляцию объема HIT-клеток. Фуросемид, который блокирует котранспортер Na / K / 2Cl островков (434445), но не блокирует каналы Cl ^— островков (T.A.K., L.S.S., неопубликованные данные), не имитировали действия DIDS или нифлумовой кислоты на регуляцию объема HIT-клеток. Как показано на рис. 3 H , применение 1 ммоль / л фуросемида в изотоническом растворе обратимо уменьшало объем клеток на ~ 15,7%, предполагая, что базальная активность переносчика опосредует влияние тонического набухания, вероятно, из-за чистого поглощения ионов ( см. обсуждение). Кроме того, добавление фуросемида к гипотоническому раствору нарушило нормальную регуляцию объема островковых клеток (рис.3 I ). Эти результаты предполагают, что регуляция клеточного объема в HIT-клетках, секретирующих инсулин, в первую очередь опосредуется чувствительными к объему Cl ^— каналами, а не катионными каналами, активируемыми растяжением, или каналами K ⁺ , и что блокада транспортера Cl ^— имеет очень сильное влияние. различные эффекты от Cl ^{— блокады канала} .

Cl

В течение некоторого времени было известно, что воздействие на островки гипотонических растворов стимулирует секрецию инсулина (7,18).Этого можно было бы ожидать, если набухание клеток активирует I _{Cl, островок} , вызывая деполяризацию клеток, увеличение открытия канала Ca ²⁺ и увеличение внутриклеточных концентраций Ca ²⁺ ([Ca ²⁺ ] _i ), что приводит к усилению экзоцитоза инсулиновых гранул. Подобная модель была предложена для объяснения гипотонически индуцированного высвобождения катехоламинов в хромаффинных клетках (19). Чтобы проверить эту гипотезу на β-клетках, мы применили гипотонические растворы к перифузированным HIT-клеткам для активации I _{Cl, островка} и использовали стандартный протокол радиоиммуноанализа для анализа секретированного инсулина (рис.4). После поддержания стабильного исходного уровня высвобождения инсулина при 0 глюкозе уровень глюкозы был увеличен до 5 мг / дл, что временно увеличивало секрецию (фиг. 4). Последующее воздействие на клетки гипотонического раствора (в данном случае 0,75 Тл) вызывало дополнительное временное увеличение секреции. Гипотоничность была достигнута за счет уменьшения [NaCl]. Однако маннит, добавленный к раствору восстановленного Na ⁺ для восстановления тонуса, полностью блокировал гипотонически индуцированную секрецию. Это подтверждает, что секреция была связана с набуханием клеток, а не с удалением Na ⁺ (данные не показаны).

Как показано на фиг. 5 A , фракционное высвобождение инсулина из перифузированных HIT-клеток увеличивалось выше базальных уровней после применения 5 мг / дл глюкозы и было двухфазным. После этого характерного ответа на глюкозу фракционная секреция инсулина временно увеличивалась после введения гипотонического раствора (фиг. 5 B ). Было обнаружено, что как DIDS, так и нифлумовая кислота снижают секрецию, стимулированную глюкозой, в изотонических условиях (сравните фиг. 5 C и D с фиг.5 A и B ), хотя это снижение не было статистически значимым. Добавление DIDS значительно снизило индуцированную гипотонами секрецию инсулина на 56% ( P <0,05) (сравните фиг. 5 C с фиг. 5 B ). В предыдущем исследовании было обнаружено, что 100 мкмоль / л DIDS блокирует 67% гипотонически индуцированного высвобождения инсулина из островков крысы (38). Напротив, на гипотонически индуцированную секрецию не влияла нифлумовая кислота 100 мкмоль / л, хотя было обнаружено, что нифлумовая кислота является более эффективным блокатором I _{Cl, островка} ( P <0.05) (сравните Рис.5 D с Рис.5 B ). Хотя может показаться парадоксальным, что DIDS блокирует большую часть гипотонически индуцированной секреции, несмотря на то, что он является менее эффективным блокатором, увеличенное набухание клеток из-за нифлумовой кислоты (рис. 3 F ) могло компенсировать снижение проксимальной деполяризации, ожидаемое для нифлуминовой кислоты. кислота. Поскольку ни DIDS, ни нифлумовая кислота полностью не ингибировали секрецию, вызванную набуханием, похоже, что активация I _{Cl, островка} не может полностью объяснять секрецию инсулина, которая следует за набуханием клеток.Таким образом, мы предположили, что компонент секреции, вызванной набуханием, может происходить через дистальные этапы секреторного пути инсулина, что объясняет, почему гипотонический раствор все еще может вызывать значительную секрецию, несмотря на блокаду плазменных каналов Cl ^—.

Чтобы проверить это, мы использовали HIT-клетки с раствором, содержащим 50 ммоль / л KCl, 100 мкмоль / л диазоксида и 0 или 10 мг / дл глюкозы. Можно ожидать, что включение диазоксида, который открывает K _ATP каналов, и высокие уровни K ⁺ будут постоянно деполяризовать HIT-клетки (31,46).Предыдущие исследования показали, что островки все еще демонстрируют стимулируемое глюкозой (31) и стимулируемое сульфонилмочевиной (474849) высвобождение инсулина в этих условиях, предполагая, что эти стимуляторы секреции могут стимулировать секрецию инсулина, взаимодействуя с дистальным K _ATP -независимым путем.

Как показано на рис. 6 A , в условиях постоянной деполяризации (при V _max , рассчитанном как -27 мВ с использованием уравнения Нернста и при условии, что внутриклеточная концентрация K ⁺ составляет 140 ммоль / л), базальная HIT секреция клеток повышалась даже при 0 глюкозы (сравните с рис.5), а последующее добавление 10 мг / дл глюкозы приводило к медленному и неуклонному увеличению секреции, предположительно происходящему через дистальные пути. Тем не менее, поразительная фаза временной секреции все еще могла быть вызвана в этих условиях путем воздействия на клетки гипотонического солевого раствора (0,75T в данном случае), даже когда также присутствовали 100 мкмоль / л DIDS или 100 мкмоль / л нифлумовой кислоты. Процентное фракционное высвобождение инсулина достигло очень высоких уровней в этих условиях, а пиковая секреция инсулина в ответ на гипотонический раствор (даже при наличии нифлумовой кислоты) была значительно выше, чем секреция, вызванная глюкозой в изотонических условиях (сравните вторую панель с третьей панелью на фиг. .6 A и C ) ( P <0,05). Интересно, что в отличие от медленной глюкозозависимой секреции, наблюдаемой при высоком содержании калия и диазоксида в изотонических условиях, гипотонически вызванная секреция с диазоксидом и высоким содержанием калия была быстрой, временной и большей амплитуды, достигая пика высвобождения 0,6–0,8% в течение 6 дней. мин смены решений. Добавление маннита для поддержания тонуса также блокировало эту вызванную гипотонией дистальную секрецию (данные не показаны).Эти результаты, таким образом, подтверждают гипотезу о том, что компонент гипотонически индуцированной секреции, вероятно, происходит через дистальный путь, не вовлекающий каналы K _ATP или деполяризацию мембраны, как было предложено для глюкозы (31) и сульфонилмочевины (47).

Сообщение для канала CLC-3 Cl

Ряд различных хлоридных каналов семейства CLC были клонированы после клонирования CLC-0 из Torpedo electroplax (50).Чтобы определить, какая молекулярная изоформа хлоридного канала может опосредовать I _{Cl, островок} в клетках HIT, проводили ОТ-ПЦР после экстракции общей мРНК клетки HIT. Олигонуклеотидные праймеры были сконструированы для амплификации опубликованной последовательности с NH ₂ -конца канала CLC-3 Cl ^— (26). Анализ кДНК клеток HIT после ОТ-ПЦР выявил полосу 593 п.н., предсказанный размер транскрипта CLC-3 (фиг. 7, , дорожка 2, ). На этом рисунке дорожка 1 указывает лестницу ДНК, а дорожки 3 и 4 были отрицательным и положительным контролями, соответственно.Секвенирование ДНК показало, что этот продукт ПЦР клеток HIT близко соответствует CLC-3, с использованием поиска BLAST (51). Последовательность продукта ПЦР клеток HIT показана на фиг.8. Анализ последовательности показывает 91% идентичности нуклеиновой кислоты с кДНК CLC3 человека (90% идентичности аминокислот), 93% идентичности нуклеиновой кислоты с мышиной и 90% (90% идентичности). аминокислота) идентичности с морской свинкой (52).

ОБСУЖДЕНИЕ

Хотя нифлумовая кислота, и DIDS блокировали I _{Cl, островок} , блокада, производимая нифлуминовой кислотой, показывала меньшую зависимость от напряжения.Гипотонические растворы (0,75–0,8T) вызывали измеримое набухание HIT-клеток с последующим небольшим RVD. Эффект нифлумовой кислоты на набухание клеток добавлялся к эффекту гипотоничности и блокировал RVD, что согласуется с гипотезой о том, что проксимальные каналы Cl ^— участвуют в регуляции объема β-клеток в HIT-клетках. Затем было обнаружено, что набухание HIT-клеток стимулирует переходную фазу секреции инсулина, как и ожидалось в более ранних исследованиях. Однако, хотя нифлумовая кислота или DIDS несколько снижали глюкозозависимую секрецию инсулина в изотонических условиях, секреция, вызванная гипотонией, сохранялась, несмотря на блокаду каналов Cl ^—.Это предполагает, что набухание, вероятно, стимулировало секрецию через более дистальный механизм, который не зависел от плазмалеммальных каналов Cl ^—. Более того, гипотонически индуцированная секреция сохранялась в условиях, которые изолировали дистальные секреторные механизмы, исключая участие проксимальных Cl-каналов в этом процессе.

В свете этих новых результатов мы представляем новую модель [Cl ^— ] -зависимой регуляции объема в островковых клетках и альтернативную интерпретацию для объяснения стимулирующего действия гипотонических растворов на секрецию инсулина (рис.9). В этой модели Cl ^— или другие анионы могут покидать клетку в базовых условиях, проходя через канал I _{Cl, островка} . Вода уходит после оттока чистого Cl ^— , оказывая тонизирующее сокращающее действие. Поскольку в изотоническом растворе наблюдается небольшой блокируемый нифлумовой кислотой внутренний ток Cl ^— (рис. 1), это означает, что чистая электродиффузия анионов из клетки может происходить по этому пути. Блокада канала Cl ^— нифлумовой кислотой снижает отток Cl ^— , одновременно уменьшая отток воды, что приводит к набуханию HIT-клеток.Эта гипотеза согласуется с нашим наблюдением, что нифлумовая кислота, нанесенная на клетки в изотонических условиях, приводит к набуханию клеток. Также известно, что Cl ^— проникает в островковые клетки через транспортер Na / K / 2Cl (43), что, как ожидается, вызовет тоническое набухание из-за поступления воды с этими ионами. Поскольку переносчик блокируется фуросемидом (20), можно ожидать, что фуросемид, применяемый в изотонических условиях, вызовет сокращение клеток, что действительно и наблюдалось. Интересно, что фуросемид не блокирует каналы Cl ^— , что согласуется с нашим выводом о том, что блокаторы хлоридных каналов нифлумовая кислота и фуросемид имеют разные эффекты.Однако нельзя полностью исключить другие действия нифлумовой кислоты на переносчики анионов (53). Хотя мы ожидали, что катионные каналы будут участвовать в регуляции объема HIT-клеток, отчасти для поддержания электронейтральности (54), мы не наблюдали каких-либо измеримых изменений в регуляции объема клеток после применения ингибиторов потенциал-зависимых K ⁺ каналы, K _ATP каналы или катионные каналы, активируемые растяжением. Хотя эти исследования ограничены строго фармакологическим подходом, который мы использовали, результаты показывают, что электрический баланс, вероятно, поддерживается посредством других, еще не идентифицированных, ионных механизмов в островковых β-клетках.

В других клеточных системах основная роль существует для активируемых объемом активированных извне выпрямляющих каналов Cl ^— в регуляции объема клеток (6,22,23,24,36,55,56,57,58,59). Таким образом, в ответ на набухание каналы Cl ^— опосредуют чистый отток анионов, который, в свою очередь, способствует RVD (606162). Сообщалось, что в β-клетках набухание клеток, вызванное пониженной внеклеточной осмолярностью, сопровождается RVD, который опосредуется петлей котранспортера Na / K / 2Cl типа Генле, поскольку RVD ингибируется фуросемидом (39).Однако в наших руках фуросемид нарушал регуляцию объема клеток, а не блокировал RVD как таковой. Майли и др. (7) наблюдали увеличение регуляторного объема (RVI) в β-клетках поджелудочной железы крыс после применения гипертонического раствора, который первоначально уменьшал объем клеток; этот RVI был заблокирован DIDS. Эти находки подтверждают важную роль транспортных механизмов Cl ^— в регуляции объема островковых клеток, хотя точная роль этих индивидуальных путей все еще не ясна. Наши результаты предполагают важную роль I _{Cl, островка} в опосредовании RVD в интактных клетках HIT.Таким образом, мы предполагаем, что эти каналы играют избирательную роль в регуляции объема β-клеток, ионном гомеостазе и контроле по крайней мере компонента проксимальной секреции инсулина.

Сообщалось, что в β-клетках крыс концентрации глюкозы, которые стимулируют секрецию инсулина, увеличивают объем β-клеток, предполагая, что чувствительный к объему механизм может способствовать глюкозозависимой секреции инсулина (7). Как наши результаты, так и результаты Miley et al. (7) показали, что увеличение объема клеток вызывает временное высвобождение инсулина из HIT и β-клеток поджелудочной железы крысы; Blackard et al.(18) получили аналогичные результаты на интактных островках крысы. Поскольку гипотонический раствор активирует I _{Cl, островок} после увеличения набухания клеток, наша первоначальная гипотеза (5) заключалась в том, что I _{Cl, островок} -опосредованная деполяризация мембраны, которая будет происходить при набухании клеток, индуцирует секрецию инсулина через зависимую от деполяризации приток Ca ²⁺ (1). Наши настоящие результаты, однако, не подтверждают эту гипотезу, потому что ни DIDS, ни нифлуминовая кислота не могут полностью ингибировать индуцированную гипотонами секрецию, несмотря на значительную блокаду каналов Cl ^—.Кроме того, мы показываем, что секреция, вызванная гипотонией, сохраняется в условиях, в которых клетки HIT устойчиво деполяризованы (например, диазоксид и высокий K ⁺ ). Таким образом, наши результаты предполагают, что гипотонический раствор запускает секрецию инсулина в первую очередь на сайтах, удаленных от мембранных сигнальных (например, ионных) событий каскада сопряжения секреции стимулов β-клеток.

Известно, что стыковка, слияние и образование поры слияния предшествует расширению матрикса гранул и последующему экзоцитозу секреторных продуктов в нескольких типах клеток (63,64).Вероятно, что увеличенный поток воды в клетку и / или поток воды через мембраны стыкованного пула гранул может способствовать экзоцитозу гранул инсулина, возможно, даже при постоянном уровне [Ca ²⁺ ] _i . Это согласуется с нашим открытием, что секреция стимулировалась гипотоническим раствором даже после того, как HIT-клетки постоянно деполяризовались комбинацией высокого содержания KCl и диазоксида, условий, которые, как известно, изолируют дистальный секреторный путь в островках (31,46,65).Интересно, что в первоначальных наблюдениях Blackard et al. (18) было обнаружено, что гипотонические условия на островках крыс стимулируют высвобождение не только инсулина, но также глюкагона, соматостатина и других гормонов. Это говорит о том, что вместо нацеливания на ионные или проксимальные сигнальные пути, специфичные для β-клеток поджелудочной железы, набухание клеток может быть нацелено на более общие механизмы, которые строго не ограничиваются β-клетками. Поскольку вероятно, что дистальные этапы экзоцитоза, используемые разными типами клеток, имеют сходные молекулярные механизмы, везикулярное высвобождение, вызванное набуханием, в этом случае можно ожидать, что приведет к высвобождению многих островковых гормонов, если оно происходит по общему пути.

Первым клонируемым каналом Cl ^— с ограничением по напряжению был CLC-0 (66). Это привело к открытию суперсемейства CLC, которое включает CLC-0, CLC-1, CLC-2, CLC-3, CLCK1, CLCK2 и другие каналы (25,6667686970). Хотя были ранние доказательства, подтверждающие гипотезу о том, что белок-опосредующий нуклеотид-чувствительный хлоридный ток (P _Cln ) был повсеместным внешне выпрямляющим регулируемым объемом каналом Cl ^— (71), теперь считается, что CLC-3, который присутствует в головном мозге, почках и сердце, среди других тканей (25), является вероятным молекулярным аналогом стимулированных объемом Cl ^— каналов (72).ОТ-ПЦР мРНК клеток HIT с использованием олигонуклеотидных праймеров на основе опубликованной последовательности CLC-3 позволила выделить транскрипт длиной 593 п.н., который был> 90% гомологичен CLC-3 морской свинки, крысы, мыши или человека. Эти данные предполагают, что CLC-3 или вариант CLC-3 могут быть молекулярным аналогом I _{Cl, островка} в клетках HIT. Хотя ясно, что сообщение CLC-3 присутствует в клетках HIT, биофизические характеристики I _{Cl, островка} не полностью согласуются с известными свойствами CLC-3.Таким образом, хотя CLC-3 и I _{Cl, островок} оба внешне выпрямляют каналы Cl ^—, которые блокируются нифлумовой кислотой, DIDS и NPPB (26), циклический АМФ активирует I _{Cl, островок} (5), но ингибирует CLC-3 (73). Кроме того, последовательности анионной селективности двух каналов различаются, при этом I _{Cl, островок} имеет галогенидную последовательность Br ^— > Cl ^— > I ^— (5,6), тогда как CLC-3 имеет галогенидную последовательность. последовательность I ^— > Br ^— > Cl ^— (74).Интересно, что I _{Cl, островок} разделяет свою уникальную последовательность селективности галогенидов с регулятором трансмембранной проводимости при муковисцидозе (75). Это предполагает, что другой канал, возможно, близкий родственник CLC-3, опосредует I _{Cl, островок} в клетках HIT. Следует отметить, что мутации одного сайта в поре CLC-3 достаточно, чтобы изменить последовательность проницаемости CLC-3 (26). Насколько нам известно, это первое сообщение о присутствии CLC-3 в препарате, секретирующем инсулин.Хотя есть некоторые расхождения между свойствами CLC-3 и I _{Cl, островок} , возможно, что близкий родственник CLC-3 или вариант сплайсинга CLC-3 может лежать в основе функционального островкового анионного канала. Альтернативно, совершенно другой белок может опосредовать I _{Cl, островок} , при этом CLC-3 выполняет некоторую другую, еще не определенную роль в β-клетках.

Как указано выше, CLC-3 может участвовать в активности проксимального канала Cl ^— в ответ на набухание клеток в β-клетках, что приводит к притоку Ca ²⁺ и компоненту секреции инсулина, связанному с этим сигнальным путем.Однако набухание также может влиять на экзоцитоз в более отдаленном месте, которое не зависит от проксимальных ионных событий, как это было недавно предложено для глюкозы (31,46,65) и сульфонилмочевины (47). Эти дистальные действия могут быть результатом прямого облегчения слияния или высвобождения гранул за счет увеличения потока воды. С другой стороны, набухание может высвобождать внутриклеточный Ca ²⁺ из хранилищ эндоплазматического ретикулума, как сообщалось в других системах (76,77). Поскольку гипотонические стимулы также связаны с активацией нескольких внутриклеточных каскадов вторичных мессенджеров, включая активацию фосфолипазы С или тирозинкиназы, мы не можем исключить возможность того, что эти механизмы связывают набухание клеток с высвобождением дистальных гранул (76).

Интересно, что Barg et al. (78) недавно предположили, что сульфонилмочевины действуют дистально в β-клетках, связывая рецепторы SUR1, присутствующие в мембранах секреторных гранул инсулина (78). Согласно этой гипотезе, связывание сульфонилмочевины с SUR1 открывает мембранные каналы Cl ^— гранул, способствуя потоку Cl ^— и воды в гранулу. Возникающее в результате набухание гранул, в свою очередь, вызывает экзоцитоз гранул. Эта гипотеза согласуется с их выводом о том, что дистальные действия глибурида, по-видимому, блокируются DIDS.Ранее мы предоставили доказательства того, что сульфонилмочевины действительно могут активировать каналы Cl ^— на поверхностной мембране β-клетки (5), хотя способность глибурида активировать I _{Cl, островок} может не разделяться всеми сульфонилмочевины как группа (79).

Заманчиво предположить, что поток воды в β-клетку после применения гипотонического раствора может запускать слияние гранул и экзоцитоз через тот же дистальный механизм, что и для сульфонилмочевины.Рорсман и его коллеги предполагают, что набухание гранул требует открытия DIDS-блокируемых каналов гранул Cl ^— и сопутствующего притока анионов, набухания гранул и экзоцитоза. Однако в наших экспериментах использование гипотонического стимула для высвобождения инсулина могло бы напрямую вызвать набухание гранул и, следовательно, было бы менее чувствительным к блокаторам каналов Cl ^—. Действительно, применение DIDS или нифлумовой кислоты к растворам с высоким содержанием K ⁺ / диазоксида, используемым в нашем исследовании, не устраняет дистальную секрецию инсулина.Если метаболизм глюкозы активирует I _{Cl, островок} , вызывая набухание β-клеток и, одновременно, деполяризацию плазматической мембраны (7), DIDS или нифлуминовая кислота должны препятствовать индуцированной глюкозой секреции через этот путь, как мы обнаружили. Еще предстоит определить, каким образом CLC-3 может участвовать в этих проксимальных и дистальных этапах пути связывания стимула и секреции β-клеток, и играют ли изменения в этих сложных этапах роль в сниженной глюкозозависимой секреции инсулина, которая, как известно. быть частью диабета 2 типа.

Cl, активированный набуханием, ^— ток в типичной ячейке HIT. A : Динамика, показывающая активацию I _{Cl, островка} гипотоническим раствором (0,8T) и ингибирование блокатором каналов Cl ^— нифлумовой кислотой (100 мкмоль / л). I _{Cl, островок} был измерен при +10 мВ (верхний график) и –65 мВ (нижний график). B : кривые тока, полученные в приведенных выше решениях во время 40-миллисекундных импульсов напряжения, приложенных с шагом +10 мВ от -120 до +50 мВ. C : Соответствующее соотношение тока и напряжения для пиковых токов показано в B . Гипотонические условия активировали выпрямляющий наружу ток, который меняет направление около –30 мВ.

Кривая доза-ответ, отображающая процент ингибирования гипотонически активируемых токов, вызванных нифлумовой кислотой при +10 мВ. IC ₅₀ , полученный из этой кривой, составлял 7 мкмоль / л.

Влияние гипотонических (0,8Т) растворов на объем HIT-клеток. Нормализованные объемы клеток HIT показаны в контрольных условиях и после применения следующего: A : 0.Гипотонический раствор 8T с нифлумовой кислотой или без нее (100 мкмоль / л, n = 6), B : гипотонический раствор с или без DIDS (100 мкмоль / л, n = 6), C : нифлумовая кислота применяется в изотоническом растворе (100 мкмоль / л, n = 4), D : последующие аппликации гипотонического раствора, E : гипотонический раствор с глибуридом или без него (100 мкмоль / л, n = 5), F : гипотонический раствор с гадолинием или без него (50 мкмоль / л, n = 3), G : гипотонический раствор с или без TEA (1 ммоль / л, n = 3), H : фуросемид применяется в изотоническом растворе (1 ммоль / л, n = 3) и I : гипотонический раствор в присутствии или в отсутствие фуросемида (1 ммоль / л, n = 4).Клетки возвращали в изотонический раствор после обработки растворами через 16 и 32 мин. * Значительное увеличение пикового объема клеток. Обратите внимание, что только нифлуминовая кислота значительно усиливала гипотонически индуцированное набухание клеток.

Глюкоза и гипотонический раствор запускают высвобождение инсулина из перифузированных HIT-клеток. Секрецию инсулина измеряли на клетках, перифузированных следующим образом: первая панель, : 0 глюкоза (0–12 мин), вторая панель, : 5 мг / дл глюкозы (12–28 минут) и третья панель : 5 мл. / дл глюкозы в присутствии изотонического раствора (□, n = 2) или 0.Гипотонический раствор 75T (▪, 28–44 мин; n = 2).

Динамика процентного фракционного высвобождения инсулина (% FXR), полученного в различных условиях с использованием перифузированных клеток HIT. A : Увеличение глюкозы с 0 до 5 мг / дл индуцировало двухфазную секрецию инсулина. B : Применение гипотонического раствора (0,75 т) в постоянном присутствии глюкозы вызвало переходную фазу секреции. C : применение DIDS 100 мкмоль / л значительно уменьшило, но не отменило гипотонически индуцированную секрецию (* P <0.05, C по сравнению с B . D : Применение нифлумовой кислоты не влияло на гипотонически индуцированную секрецию инсулина ( P > 0,05, D по сравнению с B ). Показанные результаты представляют собой средние значения от n = 4; планки погрешностей обозначают SE.

Устранение гипотонически индуцированной деполяризации мембраны не блокирует гипотонически индуцированную секрецию инсулина. Растворы содержали 50 ммоль / л калия и 100 мкмоль / л диазоксида. Устойчивая деполяризация из-за применения большого количества калия и диазоксида притупляла глюкозозависимую секрецию, тогда как гипотонически индуцированная секреция поддерживалась или даже усиливалась в этих условиях.Фракционная секреция инсулина медленно увеличивалась после повышения уровня глюкозы с 0 до 10 мг / дл, тогда как последующее применение гипотонических растворов (0,8T) спровоцировало переходную фазу секреции ( A ), которая сохранялась, несмотря на присутствие любого DIDS ( B ) или нифлумовой кислоты ( C ). Гипотонически индуцированная секреция была значительно выше, чем в изотоническом растворе. Показанные результаты представляют собой средние значения четырех разных столбцов перифузии, взятых из двух разных партий HIT-клеток; планки погрешностей обозначают SE.* P <0,05; ** P <0,05.

ОТ-ПЦР РНК клеток HIT выявила транскрипт CLC-3. Дорожка 1 показывает лестницу ДНК, а дорожка 2 показывает амплифицированную кДНК клетки HIT с полосой, очевидной на 593 п.н. Дорожка 3 показывает отрицательный контроль, чтобы исключить контаминацию геномной ДНК. В качестве положительного контроля была амплифицирована мРНК IL-1, в результате чего был получен продукт длиной 308 пар оснований, показанный на полосе 4 .

Последовательность кДНК CLC-3 хомяка.Показаны последовательность кДНК и предсказанная аминокислотная последовательность кДНК HIT CLC-3.

Модель регуляции анионов и объема в β-клетках. I _{Cl, активация островка} приводит к чистому оттоку Cl ^— с последующим оттоком воды, вызывая уменьшение объема клеток. Показано, что отток Cl ^— блокируется нифлумовой кислотой. Напротив, активность транспортера Na / K / 2Cl опосредует приток Cl ^— , за которым следует приток воды, вызывая тоническое набухание клеток.Фуросемид показан как блокатор этого процесса. Предполагается, что баланс между двумя путями приводит к увеличению объема β-клеток в базовых изотонических и анизотропных условиях.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальными институтами здравоохранения (RO1-DK46409 to L.S.S.).

Мы благодарим Дрю Ромеса за его помощь в экспериментах с объемом клеток HIT. Артуру Шерману и Клайву Баумгартену за их комментарии к более ранней версии рукописи, а также К. Паркеру и К.-ЧАС. Roh за техническую помощь.

Сноски

• Адрес для корреспонденции и перепечатки д-ра Л.С. Сатин, факультет фармакологии и токсикологии, Медицинский колледж в кампусе Вирджинии, Университет Содружества Вирджинии, Box 980524, Richmond, VA 23298-0524. Электронная почта: lsatin {at} hsc.vcu.edu.

  Получено для публикации 7 августа 2000 г. и принято в доработке 16 января 2001 г.

  4-AP, 4-аминопиридин; [Ca ²⁺ ] _i , внутриклеточные концентрации Ca ²⁺ ; DIDS, 4,4′-диизотиоцианостильбен-2,2′-дисульфоновая кислота; I _{Cl, островок} , анионопроницаемый островок поджелудочной железы β-клетки Cl ^{— канал} ; ПЦР, полимеразная цепная реакция; RT — обратная транскриптаза; РВД, снижение нормативного объема; RVI, увеличение нормативного объема; TEA, тетраэтиламмоний-Cl; ТТХ, тетродотоксин.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. ↵

   Эшкрофт Ф.М., Рорсман П .: Электрофизиология β-клеток поджелудочной железы. Prog Biophys Mol Biol 54: 87–143, 1989

2. ↵

   Sehlin J: Взаимосвязь между потоками хлоридов в островках поджелудочной железы и высвобождением инсулина. Am J Physiol 4: E501 – E508, 1978

3. ↵

   Lindström P, Norlund L, Sehlin J: Потоки калия и хлора участвуют в регуляции объема в клетках островков поджелудочной железы мышей.Acta Physiol Scand 128: 541–546, 1986

4. ↵

   Pace CS, Tarvin JT: pH-модуляция индуцированной глюкозой электрической активности в B-клетках: участие Na / H и HCO ₃ / Cl антипортеров. J Membr Biol 73: 39–49, 1983

5. ↵

   Kinard TA, Satin LS: АТФ-чувствительный ток канала Cl ^—, который активируется набуханием клеток, цАМФ и глибуридом в секретирующих инсулин клетках. Diabetes 44: 1461–1466, 1995

6. ↵

   Best L, Sheader EA, Brown PD: объемно-активированная анионная проводимость в секретирующих инсулин клетках.Pflügers Arch 431: 363–370, 1996

7. ↵

   Miley HE, Sheader EA, Brown PD, Best L: вызванное глюкозой набухание в β-клетках поджелудочной железы крыс. J Physiol 504: 191–198, 1997

8. ↵

   Eddlestone GT, Oldham SB, Lipson LG, Premdas FH, Beigelman PM: электрическая активность, концентрация цАМФ и высвобождение инсулина в островках Лангерганса мышей. Am J Physiol 248: C145 – C153, 1985

9. ↵

   Henquin JC, Meissner HP: Дибутирилциклический АМФ запускает приток Ca ²⁺ и Ca ²⁺ -зависимую электрическую активность в β-клетках поджелудочной железы.Biochem Biophys Res Commun 112: 614–620, 1983

10. ↵

    Henquin JC, Meissner HP: Ионные, электрические и секреторные эффекты эндогенного циклического аденозинмонофосфата в клетках поджелудочной железы мышей: исследования с форсколином. Endocrinology 115: 1125–1134, 1984

11. ↵

    Ikeuchi M, Cook DL: Глюкагон и форсколин имеют двойное действие на электрическую активность островковых клеток. Life Sci 35: 685–691, 1984

12. ↵

    Wiedenkeller DE, Sharp GWG: Влияние форсколина на высвобождение инсулина и содержание циклического АМФ в островках поджелудочной железы крыс.Endocrinology 113: 2311–2313, 1983

13. ↵

    Anazodo MI, Müller AB, Safayhi H, Ammon HPT: усиление индуцированного форсколином увеличения цАМФ диамидом и N-этилмалеимидом в островках поджелудочной железы крыс. Horm Metab 22: 61–64, 1990

14. ↵

    Drews G, Krippeit-Drews P, Britsch S, Kaba NK, Lang F. Ионные каналы, участвующие в высвобождении инсулина, активируются осмотическим набуханием B-клеток поджелудочной железы. Biochim Biophys Acta 1370: 8–16, 1998

15. ↵

    Best L, Brown PD, Tomlinson S: Потоки анионов, регуляция объема и электрическая активность в β-клетках поджелудочной железы млекопитающих.Exp Physiol 82: 957–966, 1997

16. ↵

    Satin LS, Smolen P: Электрический взрыв в β-клетках островков Лангерганса поджелудочной железы. Endocrine 2: 677–687, 1994

17. ↵

    Satin LS: Новые механизмы контроля секреции инсулина сульфонилмочевиной. Endocrine 4: 191–198, 1996

18. ↵

    Blackard WG, Kikuchi M, Alexander R, Renold AE: Влияние гипосмолярности на высвобождение инсулина in vitro. Am J Physiol 228: 706–713, 1975

19. ↵

    Moser T., Chow RH, Neher E: индуцированная набуханием секреция катехоламинов, записанная отдельными хромаффинными клетками.Pflügers Arch 431: 196–203, 1995

20. ↵

    Sandström PE, Sehlin J: Фуросемид снижает высвобождение инсулина путем ингибирования потоков Cl ^— и Ca ²⁺ в β-клетках. Am J Physiol 255: E591 – E596, 1988

21. ↵

    Coca-Prados M, Sanchez-Torres J, Peterson-Yantorno K, Civan MM: Ассоциация канала ClC-3 с переносом Cl ^— человеком без пигмента ресничные эпителиальные клетки. J Membr Biol 150: 197–208, 1996

22. ↵

    Xu WX, Kim SJ, So I, Kang TM, Rhee JC, Kim KW: Чувствительный к объему хлоридный ток, активируемый гипосмотическим набуханием в антральных миоцитах желудка морская свинка.Pflügers Arch 435: 9–19, 1997

23. ↵

    Carpenter E, Peers C: Активированный набуханием и цАМФ токи Cl ^— в изолированных клетках сонной артерии крысы типа I. J Physiol 503: 497–511, 1997

24. ↵

    Leaney JL, Marsh SJ, Brown DA: активируемый набуханием хлоридный ток в симпатических нейронах крыс. J Physiol 501: 555–564, 1997

25. ↵

    Kawasaki M, Uchida S, Monkawa A, Mikoshiba K, Marumo F, Sasaki S: Клонирование и экспрессия регулируемого протеинкиназой C хлоридного канала, обильно экспрессируемого у крыс нейрональные клетки головного мозга.Neuron 12: 597–604, 1994

26. ↵

    Дуан Д., Винтер С., Коули С., Хьюм Дж. Р., Горовиц Б. Молекулярная идентификация хлорного канала с регулируемым объемом. Nature 390: 417–421, 1997

27. ↵

    Santerre RF, Cook RA, Crisel RM, Sharp JD, Schmidt RJ, Williams DC, Wilson CP: Синтез инсулина в клональной клеточной линии хомяка, трансформированного обезьяньим вирусом 40 β-клетки поджелудочной железы. Proc Natl Acad Sci U S A 78: 4339–4343, 1981

28. ↵

    Satin LS, Cook DL: Доказательства наличия двух инсулин-секретирующих клеток с кальциевым током.Pflügers Arch 411: 401–409, 1988

29. ↵

    Хэмилл О.П., Марти Э., Нехер Э., Сакманн Б., Сигворт Ф. Дж.: Усовершенствованные методы фиксации тока с высоким разрешением для записи тока из клеток и бесклеточных участков мембран. Pflügers Arch 391: 85–100, 1981

30. ↵

    Herrington J, Bookman RJ: Pulse Control v4.3 : Игорь XOP для сбора данных с зажимов патч-зажимов. Майами, Флорида, University of Miami Press, 1994

31. ↵

    Gembal M, Gilon P, Henquin JC: Доказательства того, что глюкоза может контролировать высвобождение инсулина независимо от ее действия на АТФ-чувствительные каналы K ⁺ в β- клетки.J Clin Invest 89: 1288–1295, 1992

32. ↵

    Kahn SE, Fujimoto WY, D’Alessio DA, Ensinck JW, Porte D Jr: Глюкоза стимулирует и усиливает секрецию островкового амилоидного полипептида из B-клеток. Horm Metab Res 23: 577–580, 1991

33. ↵

    Fujimoto WY, Teague J: Фазовые эффекты глюкозы, п-гидроксимеркурибензоата и лизофосфатидилхолина на секрецию инсулина клетками HIT. Diabetes 38: 625–628, 1989

34. ↵

    Pasantes-Morales H, Sanchez Olea R, Miranda D, Moran J: Регулирование объема в клетках NIH / 3T3, не экспрессирующих P-гликопротеин.I. Снижение нормативного объема. Am J Physiol 272: C1798 – C1803, 1997

35. ↵

    Du XY, Sorota S: Модуляция хлоридного тока собак, индуцированного набуханием предсердий, с помощью цАМФ: протеинкиназа А-зависимые и независимые пути. J Physiol 500: 111–122, 1997

36. ↵

    Kelly MEM, Dixon SJ, Sims SM: Прямое выпрямление хлоридного тока в остеокластах кроликов активируется гипосмотической стимуляцией. J Physiol 475: 377–389, 1994

37. ↵

    Майли Х. Э., Холден Д., Гринт Р., Бест Л., Браун П. Д.: Регулирующее увеличение объема β-клеток поджелудочной железы крыс.Pflügers Arch 435: 227–230, 1998

38. ↵

    Best L, Miley HE, Yates AP: Активация анионной проводимости и деполяризации β-клеток во время индуцированного гипотонами высвобождения инсулина. Exp Physiol 81: 927–933, 1996

39. ↵

    Engström KG, Sandström PE, Sehlin J: Регулирование объема β-клеток поджелудочной железы мыши опосредуется механизмом, чувствительным к фуросемиду. Biochim Biophys Acta 1091: 145–150, 1991

40. ↵

    Christensen O, Hoffmann EK: Набухание клеток активирует каналы K ⁺ и Cl ^—, а также неселективные, активируемые растяжением катионные каналы в опухоли Эрлиха. клетки.J Membr Biol 129: 13–36, 1992

41. ↵

    Chen Y, Simasko SM, Niggel J, Sigurdson WJ, Sachs F: Ca ^{Поглощение 2+} клетками Gh4 во время гипотонического набухания: сенсорная роль растяжения -активированные ионные каналы. Am J Physiol 270: C1790 – C1798, 1996

42. ↵

    Fatherazi S, Izutsu KT, Wellner RB, Belton CM: гипотонически активированный хлоридный ток в клетках HSG. J Membr Biol 142: 181–193, 1994

43. ↵

    Lindström P, Norlund L, Sandström PE, Sehlin J: Доказательства совместного транспорта натрия, калия и хлорида в островках поджелудочной железы мышей.J Physiol 400: 223–236, 1988

44. ↵

    Sandström PE: Буметанид снижает высвобождение инсулина за счет прямого воздействия на β-клетки поджелудочной железы. Eur J Pharmacol 187: 377–383, 1990

45. ↵

    Sandström PE, Sehlin J: Na ⁺ участвует в совместном транспорте катионов Cl ^— , чувствительных к петлевым диуретикам, в β-клетках поджелудочной железы. Biochim Biophys Acta 1023: 191–196, 1990

46. ↵

    Sato Y, Anello M, Henquin JC: Глюкозная регуляция секреции инсулина независимо от открытия или закрытия аденозинтрифосфат-чувствительного K ⁺ каналов в β- клетки.Endocrinology 140: 2252–2257, 1999

47. ↵

    Elliasson L, Renström E, Ämmälä C, Berggren PO, Bertorello AM, Bokvist K, Chibalin A, Deeney JT, Flatt PR, Gäbel J, Oromada J, Larsson , Lindström P, Rhodes CJ, Rorsman P: PKC-зависимая стимуляция экзоцитоза с помощью сульфонилмочевины в β-клетках поджелудочной железы. Science 271: 813–815, 1996

48. ↵

    Best L, Yates AP, Tomlinson S: Стимуляция секреции инсулина глюкозой в отсутствие пониженной проницаемости для калия (86Rb +).Biochem Pharmacol 43: 2483–2485, 1992

49. ↵

    Aizawa T, Sato Y, Komatsu M, Hashizume K: ATP-чувствительный K ⁺ канально-независимое инсулинотропное действие глюкозы в β-клетках. Endocr Regul 26: 159–162, 1992

50. ↵

    Миддлтон Р. Э., Фазан Д. Д., Миллер К. Очистка, воссоздание и состав потенциалзависимого хлоридного канала из Torpedo electroplax. Biochemistry 33: 13189–13198, 1994

51. ↵

    Altschul SF, Madden TL, Schäffer AA, Zhang J, Zhang Z, Miller W, Lipman DJ: Gapped BLAST и PSI-BLAST: новое поколение поиска в базе данных белков программы.Nucleic Acids Res 25: 3389–3402, 1997

52. ↵

    Borsani G, Rugarli EI, Taglialatela M, Wong C, Ballabio A: Характеристика человеческого и мышиного гена (CLCN3), имеющего сходство с потенциалзависимыми хлоридными каналами и к интегральному мембранному белку дрожжей. Genomics 27: 131–141, 1995

53. ↵

    Cousin JL, Motais R: Ингибирование анионной проницаемости амфифильными соединениями в эритроцитах человека: доказательства взаимодействия нифлумовой кислоты с белком полосы 3.J Membr Biol 46: 125–153, 1979

54. ↵

    Хилле Б. Ионные каналы возбудимых мембран. 2-е изд. Сандерленд, Массачусетс, Sinauer Associates, 1992

55. ↵

    Росс П.Е., Гарбер С.С., Кахалан М.Д.: Проводимость и емкость хлорида мембраны в лимфоцитах Jurkat T во время осмотического набухания. Biophys J 66: 169–178, 1994

56. ↵

    Дорошенко П., Нехер Э: Объемно-чувствительная проводимость хлоридов в мембране хромаффинных клеток крупного рогатого скота.J Physiol 449: 197–218, 1992

57. ↵

    Кубо М., Окада Y: Регулирующий объем Cl ^— канальные токи в культивируемых эпителиальных клетках человека. J Physiol 456: 351–371, 1992

58. ↵

    Tseng GN: Набухание клеток увеличивает проводимость мембран сердечных клеток собак: доказательства наличия чувствительного к объему канала Cl. Am J Physiol 262: C1056 – C1068, 1992

59. ↵

    Worrell RT, Butt AG, Cliff WH, Frizzell RA: объемно-чувствительная проводимость хлоридов в линии клеток толстой кишки человека T84.Am J Physiol 256: C1111 – C1119, 1989

60. ↵

    Hoffmann EK: Системы транспорта анионов в плазматических мембранах клеток позвоночных (Обзор). Biochim Biophys Acta 864: 1–31, 1986

61. ↵

    Hoffmann EK, Simonsen LO: Мембранные механизмы регулирования объема и pH в клетках позвоночных. Physiol Rev 69: 315–377, 1989

62. ↵

    Стрэндж К., Эмма Ф., Джексон П.С.: Клеточная и молекулярная физиология объемно-чувствительных анионных каналов.Am J Physiol 270: C711 – C730, 1996

63. ↵

    Fernandez JM, Neher E: Измерения емкости выявляют события ступенчатого слияния в дегранулирующих тучных клетках. Nature 312: 453–455, 1984

64. ↵

    Almers W: Exocytosis (Review). Ann Rev Physiol 52: 607–624, 1990

65. ↵

    Straub SG, James RFL, Dunne MJ, Sharp GWG: Глюкоза активирует как K _ATP , зависимые от каналов, так и K _ATP , независимые от каналов сигнальные пути в островки человека.Диабет 47: 758–763, 1998

66. ↵

    Jentsch TJ, Steinmeyer K, Shwartz G: Первичная структура хлоридного канала Torpedo marmorata , выделенного путем экспрессионного клонирования в ооцитах Xenopus . Nature 348: 510–514, 1990

67. ↵

    Steinmeyer K, Ortland C, Jentsch TJ: Первичная структура и функциональная экспрессия регулируемого развитием хлоридного канала скелетных мышц. Nature 354: 301–304, 1991

68. ↵

    Thiemann A, Grunder S, Pusch M, Jentsch TJ: хлоридный канал, широко экспрессирующийся в эпителиальных и неэпителиальных клетках.Nature 356: 57–60, 1992

69. ↵

    Uchida S, Sasaki S, Furukawa T., Hiraoka M, Imai T., Hirata Y, Marumo F: Молекулярное клонирование хлоридного канала, который регулируется дегидратацией и преимущественно экспрессируется в мозговом веществе почки. J Biol Chem 268: 3821–3824, 1993

70. ↵

    Adachi S, Uchida S, Hata M, Ito H, Hiroe M, Marumo F, Sasaki S: две изоформы хлоридного канала преимущественно экспрессируются в толстой восходящей конечности. петли Генле и собирательные протоки почки крысы.J Biol Chem 269: 17677–17683, 1994

71. ↵

    Jentsch TJ: Хлоридные каналы. Curr Opin Neurobiol 3: 316–321, 1993

72. ↵

    Кавасаки М., Сусуки М., Утида С., Сасаки С., Марумо Ф: Стабильная и функциональная экспрессия хлоридного канала ClC-3 в линиях соматических клеток. Neuron 14: 1285–1291, 1995

73. ↵

    Nagasaki M, Ye L, Duan D, Horowitz B., Hume JR: Внутриклеточный циклический AMP ингибирует нативные и рекомбинантные регулируемые по объему хлоридные каналы из сердца млекопитающих.J Physiol 523: 705–717, 2000

74. ↵

    Yamasaki J, Duan D, Janiak R, Kuenzli K, Horowitz B, Hume JR: Функциональная и молекулярная экспрессия регулируемых объемом хлоридных каналов в гладкомышечных клетках сосудов собак . J Physiol 507: 729–736, 1998

75. ↵

    Fuller CM, Benos DJ: CFTR! (Обзор) Am J Physiol 263: C267 – C286, 1992

76. ↵

    Ishii T, Hashimoto T, Ohmori H: Гипотоническая стимуляция индуцировала высвобождение Ca ²⁺ из IP ₃ -чувствительных внутренних хранилищ в Клеточная линия почек зеленой обезьяны.J Physiol 493: 371–384, 1996

77. ↵

    Missiaen L, DeSmedt H, Parys JB, Sienaert I, Vanlingen S, Droogmans G, Nilius B, Casteels R: гипотонически индуцированное высвобождение кальция из внутриклеточных запасов кальция. J Biol Chem 271: 4601–4604, 1996

78. ↵

    Barg S, Renstrom E, Berggren PO, Bertorello A, Bokvist K, Braun M, Eliasson L, Holmes WE, Kohler M, Rorsman P, Thevenod F: Стимулирующее действие толбутамида на Ca ²⁺ -зависимый экзоцитоз в β-клетках поджелудочной железы опосредуется мдр-подобным P-гликопротеином массой 65 кДа.